毛细管电泳技术及应用全解.pptxVIP

1;电 泳;经典电泳;毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE）;分离过程;毛细管电泳的特点;一、CE基本原理 二、电渗现象与电渗流electroosmotic flow 三、影响电渗流的因素 四、淌度mobility 五、CE中的参数与关系式 六、影响分离效率的因素;毛细管电泳(CE)基本原理;所以，迁移速度：;电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow;2.HPCE中的电渗现象与电渗流;3. CE中电渗流的大小与方向;CE中电渗流的方向;4. CE中电渗流的流形;5. CE中电渗流的作用;CE中影响电渗流的因素;3. 电解质溶液性质的影响;第17页/共68页;4. 温度的影响;5. 添加剂的影响;淌度 Mobility ;CE中的参数与关系式 ;3.分离度 ;影响分离效率的因素—区带展宽;3.焦耳热与温度梯度的影响 ;4.溶质与管壁间的相互作用 ;5.其他影响因素 ;一、高效毛细管电泳仪 二、流程与主要部件 三、进样方式 四、检测器;第28页/共68页;仪器流程与主要部件;1.高压电源;3.缓冲液池;CE具体操作步骤： 毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。 1).清洗毛细管 对于一根新的或久未使用的毛细管，需用1mol/L的NaOH溶液、溶液、超纯水依次清洗。在有些情况下还需用、甲醇或去垢剂清洗,强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子，甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质。; 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3 min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。; 2). 更替电泳缓冲液 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3 min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。 上一步清洗过程结束后，毛细管和电极从清洗液中移至电泳缓冲液，不可避免地将强碱或强酸等溶液带至其中。缓冲液本身也会因挥发、电泳等而改变其离子强度。因此对于精确分析，每分析五次后需更换一次样品盘中的缓冲液。一般分析，半天更换一次即可。;3）毛细管电泳的进样方式; 毛细管一端插入样品瓶，加电压；;Buffer: 50 mM phosphate –TEA (pH 2.5) with 4.0% HP-β-CD (w/v) and 50% methanol; Applied potential: 30 kV; Sample: 1 mg/L propranolol dissolved in (A) (B) water, (C) methanol; (A) Pressure injection 0.5 psi., 5 s, (B) (C) electrokinetic injection 10 kV, 5 s. ; (A)Conditioning of the capillary with a low pH buffer containing CTAB, and injection of a long water plug into the capillary by pressure; (B) Field-amplified injection of cations and stacking on the boundary of water plug and the BGS, while removing of the water plug out of the capillary; (C) Separation voltage is applied. The enantiomers complex with CD and are separated, and the rest of water plug is removed. ;分离模式;一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE;二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE; 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动；; 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当