高效液相色谱仪组成及检测器种类.ppt

第三节 高效液相色谱仪;1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱；6.检测器；7.废液瓶；8.数据处理和控制系统 ;HPLC仪器结构示意图; 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。;一、高压输液系统;1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。 ;2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。; 高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。; ;恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流量。;3. 梯度洗脱装置;仅用弱溶剂;梯度洗脱装置分类;二、进样系统;通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示：;三、分离系统;柱管材料：耐腐蚀耐压 内径：2.0、3.0、4.1、4.6mm 长度：5、10、15、25cm等 固定相：颗粒细、圆、均一、刚性强 ;; 一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响。 柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。 柱温一般为室温或接近室温。;四、检测系统;在液相色谱中，有两种类型的检测器： 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等； 一类是总体检测器，它对试样和洗脱液???的物理和化学性质响应。属于此类检测器有示差折光检测器等。;㈠紫外光度检测器;⒈作用原理 依据被分析试样组分对待定波长紫外光的选择吸收性，组分浓度与吸光率的关系遵守比尔定律。;⒉工作过程;⒊特点;㈡荧光检测器;优点：是一种选择性强、灵敏度高，比紫外检测器高2?3个数量级，可达pg量级或更低，可用于梯度淋洗。 缺点：样品适用范围有限，定量分析的线性范围较窄(104-105)。;㈢示差折光检测器;㈣电导检测器