基因工程的基本操作程序四班.ppt

基因工程的基本操作程序;基因工程的基本操作程序;　 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。;原核细胞的基因结构(补充内容）;;;1．下列关于基因结构的认识中，正确的是 （ ） A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 2．（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是 （ ） A．编码区都有能编码蛋白质的序列 B．编码区都是连续的 C．非编码区都能调控遗传信息的表达 D．非编码区都有RNA聚合酶结合的位点;一、目的基因的获取;(1)从基因文库中获取目的基因;概念：基因文库 （gene library）;基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.;;提取某种生物的全部DNA;思考：基因文库如何构建？;提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA;mRNA; 真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？;基因组DNA文库;基因组DNA文库与cDNA文库的比较;依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因表达产物蛋白质等特性;1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA ;（2）利用PCR技术扩增目的基因;PCR技术; 过程;1、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A．①③④⑦⑨ B．①④⑥⑦⑧ C．②⑤⑥⑦⑨ D．①③⑥⑦⑧;（3） 人工合成;1、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应;3、目的基因主要是指_______________的结构基因。获得目的基因的常见方法有三种：（1）从基因文库中获取目的基因，根据基因的_________序列，基因在________上的位置，基因的________产物mRNA，基因的_______产物蛋白质等获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因，该技术是一项在________完成的核酸合成技术，前提条件是有一段已知目的基因的________序列，以便于合成_________。（3）如果基因较小且核苷酸序列已知，可以通过____________方法。 ;二、基因表达载体的构建——核心;质粒;2、基因表达载体的作用;不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。;3.基因表达载体的组成：;1、（多选）一个基因表达载体的构建应包括 A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因;常用的受体细胞：;1、将目的基因导入植物细胞;（2）基因枪法;（3）花粉通道法;2、将目的基因导入动物细胞;3、将目的基因导入微生物细胞;1、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是 A．结构简单、操作方便 B．繁殖速度快 C．遗传物质含量少、简单 D．性状稳定、变异少 2、基因工程常用的受体细胞有 ①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．①②④;4. 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基