基因工程的基本操作程序最新版本.ppt

;复习;;一、目的基因的获取;1.从基因文库中直接获取;;①基因组文库的构建;② cDNA文库的构建-----反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。;① 概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制_____________的核酸合成技术。 ;⑥过程：;PCR技术扩增与DNA复制的比较;目的基因的mRNA; 1.下列属于获取目的基因的方法的是 ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术合成⑤利用DNA转录形成 ⑥人工??成 ① ② ③ ⑤ B. ① ② ⑤ ⑥ C. ① ② ③ ④ D. ① ② ④ ⑥;二、基因表达载体的构建——基因工程的 核心;2.基因表达载体的组成 (1)启动子 (2)终止子 (3)目的基因 (4)标记基因等;;;真核细胞的 基因结构;;②在细胞质中 将mRNA分离并 加入反转录酶;启动子：位于基因的 首端的一段特殊的DNA 片断，它是RNA聚合酶 识别和结合的部位， 有了它才能驱动基因 转录出mRNA，最终 获得蛋白质。;;①切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的粘性末端，利于重组质粒的构建。;资 料;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以 表达载体的方式携带进去。;三、将目的基因导入受体细胞;1.将目的基因导入植物细胞的方法：;种子植物;②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到 受体细胞，并整合到受体细胞染色体的 DNA上。;植物肿瘤;31;③过程：;;;（2）基因枪法：适合单子叶植物 （3）花粉管通道法：如抗虫棉;2.将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： ;3.将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传 物质少 ②方法： ; 若通过基因过程生产人的糖蛋白 可以用大肠杆菌作为工程菌吗？;四.目的基因的检测与鉴定;（一）检测;目的基因片段;DNA分子杂交示意图 ;2.检测目的基因是否转录出了mRNA;;例:用棉铃饲喂棉铃虫， 如虫吃后不出现中毒 症状，说明未摄入目的 基因或摄入目的基因 未表达。如虫吃后中毒 死亡，则说明摄入了 抗虫基因并得到表达。; 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;归纳: 基因工程的基本操作程序;1.有关基因工程的叙述正确的是 A.限制酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作为运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供 资料;2.基因工程是在DNA分子水平上进行 设计施工的。在基因操作的基本步骤 中，不进行碱基互补配对的步骤是 A.人工合成目的基因 B.目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达;3.(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加 粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用 备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出 了耐盐水稻新品系。 (1)获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用 的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA 连接酶作用于 处。（填“a”或“b”）;(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和___________________ _____________________。 (3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用______________技术，该技术的核心是__________和_______________。;(4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功， 既要用放射性同位素标记的_____________ 作探针进行分子杂交检测，又要用_______ _______________方法从个体水平鉴定水稻 植株的耐盐性。; 4.（2009年天津高考改编）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。如图是获取植酸酶基因的流程。; 据图回答： （1）图中基因组文库 cDNA文库。 （2）B过程需要的酶是 （3）目的基因和除可从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中 和 为模板直接进行PCR扩增，