金标快速检测检测试剂卡检测技术.ppt

--克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的检测 --农业部畜禽产品质量安全监督检验测试中心（石家庄） 李志平 ;饲料中添加β-兴奋剂的原因;β-兴奋剂的危害;中国政府监控情况;β-兴奋剂的使用现状;β-兴奋剂检测方法;检测方法对比;检测方法标准;;克伦特罗金标检测试剂条的原理和使用;一、盐酸克伦特罗简介 二、金标免疫试剂条原理 三、金标快速检测试剂条检测操作步骤 四、注意事项 五、样品的提取方法 六、其它类金标速测试剂条简述;一、盐酸克伦特罗简介;何为“瘦肉精”？;1、药理作用;β2-??上腺素受体激动剂;动物种类;瘦肉精等非法使用途径;在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质； 同时也造成动物性食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。 当人们食用含有盐酸克伦特罗（瘦肉精）残留的产品后会产生一定的中毒症状。;3、克伦特罗的毒性;中 毒 剂 量;4、代谢和残留状况;半 衰 期;用药剂量：16μg/(kg.d) 持续时间：20d 停药与残留： 停药时间 肝脏残留浓度 0 d 73.8ng/g 15 d 2.4ng/g 35 d 0.7ng/g;用药剂量 ;猪尿中CL的消除曲线;5、中毒事件;二、金标免疫试剂条原理介绍;利用了免疫层析的技术 特点： 1：检测速度快，5－15分钟就可知道结果。 2：不需要任何仪器设备； 3：操作简便； 4：灵敏度高，可达到ng级水平;1、金标检测试剂的历史;几个概念：;2、金标检测技术的基本原理;金标试纸条工作原理;金标免疫检测试纸条的结构 ;金标检测技术的基本原理; 吸附的机理是胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固的结合。;用还原法可以方便地把氯金酸制备成各种不同大小直径的金颗粒、金颗粒的大小不同，颜色也不同。;塑料底板;金颗粒上标记抗原;在玻纤上喷抗原标记的金颗粒;在纤维素膜上喷克伦特罗抗体;试剂条组装;克伦特罗金标试纸条的工作原理;样品中没有克伦特罗时：;样品中有高浓度的克伦特罗时：;克伦特罗分子;因此，随着样品中克伦特罗浓度由高到低，试纸上T线上的颜色由浅到深：; 在医学上使用的各种金标试纸条，如艾滋病、乙肝、海洛因等检测试纸条，要求非常严格。纤维素膜上除喷上抗体形成T线（Test）外，还喷有形成C线（Control）的抗体。 C线应在检测过程中的任何情况下都应该出现，否则就证明试纸条在运输、保存等过程中发生了意外情况，如高温、潮湿等，导致试剂条失效。这样就有了一个试剂本身质量的判定标准，避免由于试剂保存等原因造成的假阳性或假阴性等情况的出现。;T线; ;三、 克伦特罗金标试剂的使用(杭州迪恩科技公司产品);产品包装：;产品可于室温下阴凉避光干燥处贮存，有效期12个月（无需在冰箱中保存）。 检测阈值：3ng/mL 检测不需要其它任何的辅助仪器 ;操作步骤1.?检测准备;2、操作步骤;3.?结果判定;阴性;操作示意图;结果判读;金标读数仪：美国产品可以进行定性和定量的检测分析；体积小，重量轻，便于携带；适合于基层应用单位使用 ;四、?注意事项;6.在加样孔中滴三滴样品，3-5分钟内判读结果，不要延长时间。 7. 注意试纸条的干燥保存，避免受潮，切忌冷冻；打开包装后，应在1小时内尽快使用。8.每条试纸只能使用一次，请在有效期内使用；9.多个样品同时检测时请做好标记； 10.本产品仅作为筛查，对于判定为阳性或者可疑阳性样本应该用另外的检测方法作进一步确定（如GC/MS或LC/MS/MS）。;五、样品的提取方法; 二、组织提取方法 方法1： 1.1、用刀具粉碎组织样品 1.2、用适量粉碎后样品置于离心管中 1.3、于沸水中煮泡5分钟，取出离心管室温放置10-15分钟 1.4、用滴管吸取离心管中的组织渗出液，加1滴在检测卡的加样孔中 1.5、再用滴管加入缓冲液2滴，5分钟后判断结果 ; 方法2： 2.1、用超声仪或类似仪器将样品均质化（或简单用刀具粉碎组织样品）。 2.2、取约5g均质化后的样品置于10ml试管中。 2.3、加约5ml3%三氯乙酸。 2.4、涡旋混匀后抽提10min（间隔震荡2-3次）。;