镉、铜对长江华溪蟹(SINOPOTAMONYANGTSEKIENSE)在细胞和分子水平的影响.pdf

镉、铜对长江华溪蟹（ SINOPOTAMON YANGTSEKIENSE ）在细 胞和分子水平的影响 【摘要】：长江华溪蟹 (Sinopotamonyangtsekiense)广泛分布在我国的淡 水水域中， 镉、铜对该物种的影响在一定程度上可反映出重金属对水 体中十足类甲壳动物的影响。 利用最新发展起来的分子毒理学研究技 术，采用体外暴露的方式，研究镉、铜对溪蟹的影响。本实验共分五 个部分：第— 部分镉对长江华溪蟹的急性毒性与积累采用原子吸收分 光光度计，测定镉在溪蟹体内的生物积累。结果表明：镉的生物积累 具有选择性，积累的顺序依次为： 外壳＞鳃＞肝胰腺＞触角腺＞卵巢； 镉对蟹体的作用具有浓度 —剂量效应关系； 但镉对蟹体的时间 —剂量 效应关系不很明显。 第二部分镉对长江华溪蟹精子发生过程中高尔基 体超微结构的影响应用透射电子显微技术 (TEM) ，研究了低浓度镉 (1.87mg ／L)对溪蟹各级生精细胞超微结构的影响。结果表明：各级 生精细胞中高尔基体均有不同程度的变化。 随镉处理时间的延长， 高 尔基体数量增多，扁平膜囊减少，膜囊肿大，膜囊逐渐解体；分泌小 泡增多，小泡体积增大。其中，精母细胞表现较为突出，尤其是次级 精母细胞。另外，其他的细胞器如细胞核、线粒体、内质网和溶酶体 也有不同程度的变化。 这些变化使精子发生受阻。 第三部分镉对长江 华溪蟹精子发生过程中细胞核超微结构的影响应用透射电子显微技 术(TEM) ，研究了低浓度镉 (1.87mg ／L) 对溪蟹各级生精细胞中细胞核 超微结构的影响。结果表明：核的形状从正常的圆形或卵圆形，到处 理后形状多样；核膜先肿胀膨大，进而破裂，核孔增多。核内染色质 也受到影响，分布不均匀或聚集成块，核仁有或无。第四部分铜对长 江华溪蟹酯酶同工酶的影响采用聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳，活性 染色的方法，研究了不同浓度的铜处理后对雄蟹三种组织器官 (鳃、 肝胰腺、精巢 )酯酶同工酶 (EST)的影响。结果表明：雄蟹的鳃、肝胰 腺、精巢酯酶同工酶都出现了不同程度的变化， 鳃酯酶同工酶有 2 条 酶带缺失， 相对活性变化不大； 肝胰腺和精巢既有新增的酶带又有缺 失的酶带，新增酶带相对活性增强，缺失酶带相对活性减弱，说明铜 对酯酶同工酶既有激活又有抑制作用， 并存在组织差异和剂量效应关 系。同时还分析了铜对雄蟹酯酶同工酶影响的可能机理。 第五部分铜 对长江华溪蟹精巢总 DNA 的损伤用浓度为 2.43mg ／L 氯化铜 (CuCl_2)溶液采用体外暴露的方式处理雄蟹，分别在 10d、25d、40d 随机取 3 只雄蟹，先用 EDTA 和 70％乙醇作为固定剂固定，然后采 用经典的酚 -氯仿法提取精巢总 DNA ，以总 DNA 为模板，进行 RAPD 分析。 DNA 电泳结果显示：铜处理后的精巢遗传物质未出现断裂。 RAPD 扩增产物结果表明：铜能使精巢总 DNA 的条带发生变化。在 24 条随机引物中， 一部分随机引物在对照组及处理组模板 DNA 的扩 增条带出现了差异， 并且随着处理时间的延长， RAPD 电泳条带的差 异也越明显。同时还探讨了材料的固定方法和模板 DNA 量的确定。 【关键词】：长江华溪蟹