实验五血清尿素氮的测定.docVIP

实验五血清尿素氮的测定 实验五血清尿素氮的测定 PAGE PAGEPAGE 2 实验五血清尿素氮的测定 血清尿素氮的测定 一.实验原理 血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。即可求得血清中尿素的含量。 由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。 在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。 二.实验操作 取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作 管 试 号 剂 测定管 标准管 空白管 血清(ml) —— —— 尿素氮标准应用液(ml) —— —— 蒸馏水(ml) —— —— 二乙酰一肟试剂(ml) 尿素氮试剂(ml) 混匀后置沸水浴中煮沸12分钟，取出在冷水中冷却5分钟，分光光度计波长540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。 三.计算 正常值参考范围3．57～14．28mmol／L 四.临床意义 血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、 胆红素及氨等。其中尿素含量约占l／3～1／2。尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。 五.试剂 1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml，浓硫酸44ml，85％磷酸66ml，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg，硫酸镉(3CdSO４·8H2O)2g，溶解后稀释至1000ml。 ／L二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g，加入蒸馏水约900ml，溶解后稀释至1000ml. ３.尿素氮标准贮存液(357mmol／L)：称取尿素溶解于蒸馏水中定容至1000ml。 ４.尿素氮标准应用液／L)；取贮存液5ml，加蒸馏水至100ml。