植物组织培养培养基及操作技术.ppt

第三章 培养基及一般培养技术（4学时）;第一节 培养基的成分和种类;一、培养基的成分;1、无机营养元素(inorganic element) ;在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 种类：VBl(盐酸硫胺素)、 VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、 Vc（抗坏血酸）、 VH(生物素)、 VB11(叶酸)、 VB12（钴胺素)等。 使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。;又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L， 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 ;作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 使用浓度：为10—200mg／L。;5、有机附加物 （天然复合物）;6、植物生长调节物质(hormone) ; *作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。 在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5—10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。;吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸：NAA（naphthalene acetic acid） 吲哚丁酸：IBA（indolebutyric acid） 2,4-二氯苯氧乙酸：2,4—D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) ;生长素作用强弱顺序：;种类： 6—BA(6—苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素);细胞分裂素作用强弱顺序;GA3（赤霉酸）： 作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。 赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。;7、培养材料的支持物 ---琼脂(agar) ;固体培养基的特点（与液体培养基相比）:;8、抗生物质(antibiotic) ;9、活性炭(active carbon) ;10、水（water);二、培养基的PH值 (pH value);种类; 培养基(culture medium) ：是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。 ;1、根据态相不同：固体培养基、液体培养基; 若只含有大量元素与微量元素和碳水化合物的培养基，称为基本培养基。 在基本培养基的基础上，添加各种各样的生长调节物质和其他有机附加物的培养基叫完全培养基。;1、MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。 特点：是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。; 成分名称 ;2、White培养基：1943年由White为培养番茄根尖而设计的。 特点：无机盐浓度较低，适于生根培养。;(4)B5培养基:是1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计的。 特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。;2、White培养基 ◆1943年由White为培养番茄根尖而设计 ◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 ◆无机盐浓度较低 ◆使用广泛 ◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果;3、B5培养基 ◆1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计 ◆含有较低的铵盐 ◆较高的硝酸盐和盐酸硫胺素;4、N6培养基 ◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 ◆ KH2PO4和（NH4）SO4含量高，不含钼;第二节 培养基的配制; 一、 培养基的配制 ;单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml 或mg/L表示。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。 配制生长素类：可先用少量0.1N的NaOH或95%酒精助溶。浓度为：1-5mg／ml。 配制细胞分裂