植物基因工程技术及应用.ppt

（5） 农杆菌介导 几乎全部双子叶植物尤其是豆科类植物根部常常会形成根瘤, 这是因为植物根部被一个革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌（A.tumefaciens）感染所致, 其致瘤特征是由该菌细胞内野生型质粒 Ti介导。 二元整合转化程序 将外源基因克隆在大肠杆菌-农杆菌穿梭质粒T-DNA区内; 重组质粒直接转化农杆菌株, 该菌株携带只含vir区不含T-DNA区Ti辅助质粒; （2）农杆菌介导外源基因转移技术通常操作 ①将表面消毒叶片切成小块 ②小块在过夜培养并稀释到一定浓度含外源基因根癌农杆菌液中共培养几分钟, 使让根癌农杆菌感染叶片切块伤口。 ③从菌液中捞出小叶块, 培养基中培养2天。 ④在含头孢霉素选择培养基中筛选转化细胞。继续培养, 转化细胞分化出芽。 ⑤将芽转入含有抗生素生根培养基上, 诱导生根。 ⑥将完整转基因植株移栽到土壤中。 a b c d 分子判定 : PCR Southern blot Northern blot Western blot 蛋白质电泳 5. 转基因植株判定及分析 Southern blot Northern blot Western blot和蛋白质电泳 （三）转基因生物商业化通常步骤 　1. 试验室试验步骤: 经过了试验室试验, 技术成熟以后才开始进行中间试验步骤。 2. 中间试验步骤: 这个步骤在田间进行, 通常需要两年左右时间。田间管理评价包含具体位置、与人群距离、面积、隔离等多项具体要求。 3. 环境释放评价: 需要两年。在这个步骤试验能够再扩大部分面积, 但也有很多要求, 也必需在相对封闭环境下进行。4. 生产试验: 生产试验规模能够深入扩大。本阶段评价关键是评定转基因生物对环境是否有影响和压力。 5. 假如要做食品, 需要再对独立性、致敏性、抗营养因子等进行评价, 还需要提交综合性评价。”　　根据中国现行同意步骤, 转基因商业化同意有年限控制, 通常时限是4年。4年到期后, 需要重新报批。　 （四）种植转基因植物风险性 破坏生态环境和影响人类健康。 1.安全性问题 转基因植物存在用于选择性标识抗生素, 以及导入植物DNA序列在加工过程中可能出现改变。 2.环境及生态问题 导入植物目基因是否转入其她植物, 是否会破坏生态平衡。 　　首先是毒性问题。部分研究学者认为, 对于基因人工提炼和添加, 可能在达成一些大家想达成效果同时, 也增加和积聚了食物中原有微量毒素。  　　其次是过敏反应问题。对于一个食物过敏人有时还会对一个以前她们不过敏食物产生过敏, 比如: 科学家将玉米某一段基因加入到核桃、小麦和贝类动物基因中, 蛋白质也随基因加了进去, 那么, 以前吃玉米过敏人就可能对这些核桃、小麦和贝类食品过敏。  　　第三是营养问题。科学家们认为外来基因会以一个大家现在还不甚了解方法破坏食物中营养成份。  　　第四是对抗生素抵御作用。当科学家把一个外来基因加入到植物或细菌中去, 这个基因会与别基因连接在一起。大家在服用了这种改良食物后, 食物会在人体内将抗药性基因传给致病细菌, 使人体产生抗药性。  　　第五是对环境威胁。在很多基因改良品种中包含有从杆菌中提取出来细菌基因, 这种基因会产生一个对昆虫和害虫有毒蛋白质。在一次试验室研究中, 一个蝴蝶幼虫在吃了含杆菌基因马利筋属植物花粉以后, 产生了死亡或不正常发育现象, 这引发了生态学家们另一个担心, 那些不在改良范围之内其它物种有可能成为改良物种受害者。  　　最终, 生物学家们担心为了培养部分更具优良特征, 比如说含有更强抗病虫害能力和抗旱能力等, 而对农作物进行改良, 其特征很可能会经过花粉等媒介传输给野生物种。 ③ “三明治”事件 由含有抗虫性Bt基因转基因玉米做成。这种玉米可产生一个Cryge蛋白质, 此物是一潜在致过敏性源。所以美国食品与药品管理局（FDA）只同意这种玉米作饲料而非食用具。 美国一家食品企业生产一个油炸三明治——Taco, 上下夹层是玉米粉, 中间为肉馅。 使大家对转基因作物及其产品安全性问题充满了忧虑 转基因植物多个经典事件 ① “马铃薯”事件 英国《独立报》披露了转基因食品巨头孟山都企业一份秘密汇报 不能确定转基因和非转基因马铃薯化学成份有什么差异 对使用转基因土豆大鼠, 没有补充蛋白质以预防饥饿 供试动物数量少, 饲喂多个食物都不是大鼠标准食物 试验设计差, 未作双盲测定 统计方法不妥, 试验结果无一致性 试验错误 含雪