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优点：较直接法敏感性高 一种标记抗体能用于相应动物制备的多种特异性抗体，检测多种抗原 缺点： 较直接法费时 非特异性染色稍重 步骤：二步法 第五十五页，共86页 优点：较直接法敏感性高 一种标记抗体能用于相应动物制备的多种特异性抗体，检测多种抗原 缺点： 较直接法费时 非特异性染色稍重 步骤：二步法 第五十六页，共86页 4．显色原理 （1）HRP标记显色：HRP是最常用的标记酶，其显色原理如下： HRP + H2O2 ←→ HRP · H2O2 + 供氢体（电子供体） HRP + H2O + 供氢体（氧化型） HRP的特异性底物为H2O2 ，在分解H2O2过程中，与H2O2形成复合物，无电子供体存在时，反应再进行，有电子供体存在时则迅速生成水，酶被还原，电子供体被氧化、聚合，再经氧化环化后形成吲哚胺多聚体。红外光分析表明，这一多聚体进一步氧化环化形成苯乙阱聚合体，在酶反应部位形成不溶性棕褐色沉淀，与组织对比清晰。 第五十七页，共86页 第五十八页，共86页 HRP催化的酶促反应第一