兔肝脱氧核糖核酸的提取.pptVIP

第一页，共12页 实验目的 掌握从动物组织中提取DNA的原理和方法。 第二页，共12页 基本原理 第三页，共12页 步骤： (一)脱氧核糖核蛋白的制备 10ml刻度离心管取8ml兔肝匀浆，3000转10分钟；（取试管标号，加试剂） 弃上清后，沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠8ml ，搅匀后3000转10分钟。弃上清所得即脱氧核糖核蛋白。（加DNA标准液和蒸馏水，二苯胺试剂，加二苯胺试剂的试管不能放在试管架上） 第四页，共12页 （二）DNA粗制品的提取 沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠（终体积为4ml）； 搅匀后 ，逐滴 + 0.5ml 15％SDS，搅拌3-5min ，溶液粘稠略带透明。（DNA与蛋白分离） + 1.0ml5M NaCl（终浓度1M），轻搅3-5min； + 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min， 3000转10分钟； （实验二的试管放沸水浴） 第五页，共12页 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min，3500转15分钟；（取出实验二的试管室温放冷并595nm比色，注意添水到水浴锅中） 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 两倍体积的95％的乙醇抽提； DNA析出，弃乙醇后则得到白色DNA粗制品。 *进行实验二的第二步 第六页，共12页