免疫沉淀试验.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * - + （三）免疫电泳示意图 第六十三页，共77页 第六十四页，共77页 技术评价： 1.分辨率较高 2.仅定性 3.扩散时间长，影响因素多，结果较难分析 4.目前大量应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常体液蛋白的识别与鉴定。 第六十五页，共77页 抗原抗体在凝胶中直接发生沉淀反应，在适当位置形成抗原抗体复合物，经染色后，可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型 　 原理 区带电泳 ＋ 沉淀反应 （四）免疫固定电泳 第六十六页，共77页 　左图为IgG κ型, 中图为IgG λ型，右为正常 SP G A M κ λ SP G A M κ λ SP G A M κ λ （四）免疫固定电泳示意图 第六十七页，共77页 原理： 待检蛋白电泳 固定剂及各类抗血清加于凝胶表面的泳道 抗原与对应抗体反应 沉淀 漂洗 染色 某一抗原的存在? 第六十八页，共77页 分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅需数小时，结果易于分析。 应用 最常用于M蛋白的鉴定与分型，也用于尿中本周氏蛋白质的检测与κ、λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测与分型。 优点 （四）免 疫 固 定 电 泳 第六十九页，共77页 应用:M 蛋白的鉴定和分型 第七十页，共77页 （五）交叉免疫电泳 （六）自动化免疫电泳 第七十一页，共77页 第四节 免疫沉淀试验的临床应用免疫浊度法：蛋白质的检测如免疫球蛋白、补体、类风湿因子、C反应蛋白等 第七十二页，共77页 第五节 临床常用免疫沉淀试验试剂方法特点 一、胶乳增强的透射免疫比浊试验在全自动生化分析仪中的应用 二、胶乳增强的透射免疫比浊试验在血凝固分析仪中的应用 三、免疫固定电泳在半自动电泳仪中的应用 四、散射免疫比浊试验在特种蛋白免疫分析仪中的应用 第七十三页，共77页 第六节 影响免疫沉淀试验的主要因素 如温度、电解质、酸碱度等 第七十四页，共77页 名词: 沉淀反应 简答: 1.双向免疫扩散试验的应用 2.免疫电泳技术的类型 思 考 题 第七十五页，共77页 1.根据海德堡曲线理论，下列说法不正确的是 A 抗原过量是产生钩状效应，沉淀物少 B 抗体过量时，沉淀物也少 C 抗原抗体比例适当时产生沉淀量最多 D 抗原过量导致测定失败 E 抗体过量导致测定失败 第七十六页，共77页 2.双向扩散试验中沉淀环弯向抗原一方是 A 抗原分子量大 B 抗体分子量大 C 抗原抗体分子大致相等 D 抗原扩散快 E 抗体扩散快 3.单向扩散实验中小分子抗原和较短时间扩散（24h）的结果处理宜用 A Mancini曲线 B Fahey曲线 C 海德堡曲线 D 直线 E 抛物线 第七十七页，共77页 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 单向扩散试验 上排为5个不同浓度的参考品； 下排为患者血清，下排右2为异常病理血清 一、单向免疫扩散试验 第三十一页，共77页 应 用 IgG、IgA、IgM、C3、C4、 转铁蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前白蛋白 等多种血浆蛋白的检测 第三十二页，共77页 技术要点： 1.制板 2.打孔 3.加样 4.扩散 二、双向免疫扩散试验 第三十三页，共77页 第三十四页，共77页 第三十五页，共77页 1.判断抗原或抗体的存在 以及估计相对含量 2.分析抗原或抗体相对分子量 二、双向免疫扩散试验 第三十六页，共77页 3.分析抗原的性质 二、双向免疫扩散试验 第三十七页，共77页 第三十八页，共77页 4.滴定抗体的效价 5.鉴定抗原或抗体纯度 二、双向免疫扩散试验 第三十九页，共77页 应 用 1.AFP检测的最早方法 2.血清中含量较高的酶类、细菌病毒感染后血清中产生的抗体的检测 第四十页，共77页 三、免疫电泳技术 第四十一页，共77页 优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 　　3.增加了分辨率。 　　　 电泳分析 ＋ 沉淀反应 抗原抗体反应 的高度特异性 电泳技术的高 分辨率、快速、 微量 三、免疫电泳技术 第四十二页，共77页 电泳（electrophoresis） ：在外加电场的作用下带电颗粒向着其电性相反的电极移动，称为电泳。 第四十三页，共77页 电泳迁移率： 定义：同一电场条件下，