免疫组织化学染色技术.pptVIP

冰冻切片的免疫组织化学染色 冰冻切片的免疫组织化学染色也是常用的技术，但一般情况下不用，因为冰冻切片操作较复杂，不易操作，要求标本必须是深低温快速冷冻，标本不如石蜡块易保存等，但优点是组织的各种抗原保存好。因此一般情况下，只有在应用石蜡切片进行免疫组化染色，包括经过抗原热修复或蛋白酶消化后，仍不能得到阳性染色结果时，才考虑使用冰冻切片染色。 第六十三页，共93页 第四节 双重免疫组织化学染色 应用免疫组织化学染色方法在同一张组织切片或细胞涂片上同时或先后显示两种抗原成分，即为双重免疫标记。光镜下通过标记物或其反应生成物的颜色来标记不同的抗原成分，以帮助研究者了解含有这些不同抗原的各类细胞、组织之间的相互关系。 可能遇到的问题是：后一种免疫染色所用的抗体系统可能与前一种染色所用的抗体系统发生交叉反应，从而造成叠加污染，失去双重染色的准确性和意义。为避免这种交叉反应，研究者建立了一些方法，按其作用原理和方式，可分为洗脱法和非洗脱法。 第六十四页，共93页 一、洗脱法 1. 基本原理： 可选用同种动物产生的特异性抗体（如兔抗X和兔抗Y IgG 抗体）为一抗，另一种动物相应的抗体（如生物素标记的羊抗兔IgG抗体）为二抗，用ABC、SP或SABC方法，或应用EnVison