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人肺表面活性物质相关蛋白 B （SP-B）酶联免疫分析（ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关 液体样本中肺表面活性物质相关蛋白 B（ SP-B）的含量 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肺表面活性物质相关蛋白 B（ SP-B）水平。用 纯化的人肺表面活性物质相关蛋白 B（ SP-B）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗 的微孔中依次加入肺表面活性物质相关蛋白 B（ SP-B）再与HRP标记的SP-B抗体结合， 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催 化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的肺表面活性物 质相关蛋白B（ SP-B）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标 准曲线计算样品中人肺表面活性物质相关蛋白 B（ SP-B）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 圭寸板膜 2 片(48) 2 片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1X 48 1X 96 2-8 C保存 标准品：54n g/L 0.5ml X 1 瓶 0.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 标准品稀释液 1.5ml X 1 瓶 1.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 酶标试剂 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 样品稀释液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂A液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂B液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 终止液 3ml X 1 瓶 6ml X 1 瓶 2-8 C保存 浓缩洗涤液 (20ml X 20 倍)X 1 瓶 (20ml X 30 倍)X 1 瓶 2-8 C保存 样本处理及要求： 1?血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转份）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。 尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右（2000-3000转份）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分 钟左右（ 2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持 2-8C的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4）,用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融 . 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100 M，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 d，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100 d分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 d, 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50dl 弃掉，再各取 50dl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50 d分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 d，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50dl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50 d，混匀后从第九第十孔中各取 50 d弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 d, 浓度分别为 36ng/L ， 24ng/L ， 12ng/L ， 6ng/L ， 3ng/L ） 。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品