免疫学检测技术 (4).pptVIP

第六十二页，共96页 第六十三页，共96页 二、单克隆抗体的制备 （一）动物的选择与免疫 （二）细胞融合 （三）选择杂交瘤细胞及抗体检测 （四）杂交瘤的克隆化 （五）杂交瘤细胞的冻存与复苏 （六）单克隆抗体的大量生产 （七）单克隆抗体的鉴定 第六十四页，共96页 第六十五页，共96页 （一）动物的选择与免疫 1．动物：纯种BALB/C小鼠 较温顺。 离窝的活动范围小， 体弱，食量及排污较小， 一般环境洁净的实验室均能饲养成活。 第六十六页，共96页 2．免疫方案 ：至关重要 （1）可溶性抗原免疫：一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。 第六十七页，共96页 初次免疫： 抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点） ↓ 3周后 　第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml） 第三次免疫 剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价） ↓ 3周后 加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射） ↓2- 3周后 　取脾融合 ↓ 3天后 第六十八页，共96页 亲合力常以亲合常数K表示。 K的单位是升/摩尔（L/mol）。K是该抗血清能达到的最小检出量（灵敏度）的倒数，K=1/[H]，[H]是最小检出量，通常，K的范围在10 ～10 L/mol之间，也有