食品中致病性弧菌的检测和计数NMKLNo156.pdfVIP

食品中致病性弧菌的检测和计数 该 NMKL 法尚未经协同研究证实 1.适用范围 本法可用于检测和计数食品中的副溶血性弧菌，霍乱弧菌，刨伤弧菌和溶 藻弧菌。 这些对人类有致病性的弧菌可能由粪便污染或水源受到污染而在食品中出 现。在食品，尤其是贝类、蜊蛄和鱼的微生物学控制和与疾病爆发有关的微生 物学调查中可能需要对该菌进行检测。 2.定义 弧菌是兼性厌氧，有动力，革兰氏阴性，常呈逗号形的杆菌。钠离子是大 多数菌株（霍乱弧菌除外 )所必需的一种生长因子。大多数菌种为氧化酶阳性， 过氧化氢酶阳性，发酵葡萄糖不产气。它们一般出现于盐浓度范围较宽的水域 环境及海洋动物的表面和肠道中。一些菌株也可在淡水中发现 (霍乱弧菌 )。 副溶血性弧菌呈现下列的生物化学反应模式：氧化酶阳性，在 42℃生长， 精氨酸脱氢酶阴性，赖氨酸脱羧酶阳性，不发酵蔗糖但可将硝酸盐还原为亚硝 酸盐。可发酵糖类但不产气。在盐 (氯化钠 )浓度为 6％时不能生长。 霍乱弧菌有如下的生物化学反应特性：氧化酶阳性，在 42℃生长，缺少精 氨酸脱氢酶， 发酵蔗糖， 可将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 在无钠离子时可以生长。 在盐浓度为 3％时可以生长，而盐浓度为 8％时不能生长。 创伤弧菌呈现如下的生物化学反应模式：氧化酶阳性，在 42℃生长，缺少 精氨酸双水解酶，赖氨酸脱羧酶阳性，不能发酵蔗糖但可将硝酸盐还原为亚硝 酸盐。在无盐或盐浓度为 8％的培养基中不能生长。 溶藻弧菌见表 1。 所有弧菌在不同程度上都会受到 0 ／129 弧菌抑制剂 (0 ／129 Vibrostaticum) 的抑制。 3.参考文献 NMKL Method No.91，2nd ed.1988：Pretreatment of foods for microbiological examination. NMKL Report No.5，2nd edition，1994：Quality Assurance Guidelines for Microbiological Laboratories. 4.原理 将欲检测该菌的已知量的食品接种于一种液体选择性培养基中，培养后涂 布样品于一种固体选择性培养基上。 可疑菌落经进一步生物化学检验。 此外，可将已知量的可疑食品直接接种于一种选择性固体培养基上进行定量 测定。 5. 培养基和试剂 5.1 稀释剂 将 8.5g 氯化钠和 1.0 g 蛋白胨溶于 1000mL 蒸馏水中并煮沸，调节 PH 使之 灭菌后 25℃为 7.0±0.2。分装稀释剂于试管或广口瓶中以使 12l℃高压灭菌 20min 后分别含 9.0±0.2ml 和 90 ±2ml 。 5.2 液体选择性培养基 5.2.1 含 2 ％盐的碱性蛋白胨水 酵母浸膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 20g 蒸馏水 至 1000ml 高压灭菌后 25℃时 PH 为 8.6±0.2。 倾入 250ml 的锥形瓶中，每瓶 200ml，121℃高压灭菌 15min。 5.2.2. 盐多粘菌素肉汤 酵母浸膏 3g 胰蛋白胨 10g 氯化钠 20g 蒸馏水 至 1000ml 将各成分加热溶解，调节 PH 以使灭菌后 25℃时最终 PH 为 8.6±0.2。 121℃高压灭菌 15min。使用前