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流感监测样本采集有关事项第1页/共21页山东省首例甲流感检测过程第2页/共21页不同采样人员采集的样本导致不同的检测结果！第3页/共21页监测目的监测流感活动水平和流行动态；及时发现流感病毒变异并做出预警；为全球及我国流感疫苗毒株的预测和推荐提供依据。监测对象和时间第4页/共21页监测对象：流感样病例，即发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者。监测时间 ：所有国家级流感样病例监测哨点医院和流感监测网络实验室均全年开展流感样病例监测。 流感样病例标本的采集第5页/共21页北方省份每家哨点医院在4-9月份每月采集5-15份流感样病例标本，10月-次年3月每周采集10-15份流感样病例标本。应避免集中、突击采样。采样对象：发病3天内的流感样病例。（发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者。）标本采集种类包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子。标本采集后放入含3-4ml采样液的采样管中。 第6页/共21页临床样本收集的注意事项要做好自我保护，操作要细心，严防标本间交叉污染采集禽流感疑似病人的标本，最好采集下呼吸道吸取物采集标本要有一定力度标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感第7页/共21页第8页/共21页第9页/共21页临床标本的包装标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧；将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本；在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密封。同时填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记表”，用另一塑料袋密封；将装标本的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个塑料袋内再次做密封。所有容器必须有生物危险标识。 流感样病例标本运送第10页/共21页标本采集后在保证生物安全条件下当天立即运送至相应的流感监测网络实验室，保存温度为4℃以下；如未能及时送至实验室的，应置-70℃或以下保存，并应保证采集的标本1周内送到对应的网络实验室。标本应避免反复冻融。保证样本的检测阳性率。暴发疫情标本采集第11页/共21页采集发病3天内流感样病例的鼻、咽、咽鼻拭子标本，必要时可采集急性期（发病7天内）和恢复期（发病2-4周）双份血清标本。每一起暴发疫情至少采集10份咽、鼻拭子标本（如果现症病例在10例以下的，应全部采样）。不能明确病原的可增加采样批次和数量。标本运输：4℃条件下，于24小时内运送至流感监测网络实验室 。第12页/共21页 实验室检测简介 第13页/共21页 样本采集 双份血清鼻咽拭子 快速诊断 病毒分离 分型鉴定血凝抑制试验或中和试验 第14页/共21页 样本采集 双份血清鼻咽拭子 快速诊断 病毒分离 分型鉴定血凝抑制试验或中和试验 第15页/共21页不合格标本处理第16页/共21页明确原则：未标记的标本，最主要的没有检测价值的标本提供的标本背景资料不清；标本标记与采样记录不符，并且无法追溯修正；采样后处理错误的标本（如：用于血清学检测的标本出现了严重溶血；血象检测标本未抗凝等）；标本量（数量和采样液的量）严重不足；保存与运输条件不当或严重超出时限；以及其他未达到本次采样实际要求的标本第17页/共21页临床标本处理鼻、咽拭子：为带有聚丙烯纤维的拭子标本，应先将带有聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出。鼻咽抽取液：用干净灭菌的毛细吸管在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，置4℃待其自然沉淀5～10min，取上清。上清液可直接接种或低温保存。组织标本的处理：取肺组织标本放至平皿中，用灭菌生理盐水清洗肺组织2～3遍，研磨成组织悬液，配置成10％～20％的组织悬液，2000rpm离心10min，加入抗菌素，取上清直接接种。如原始采样液中未加入抗菌素，应在标本接种前补加，庆大霉素终浓度为10mg/mL，青/链霉素（终浓度:青霉素G 100U/mL,硫酸链霉素100μg/mL），混匀后置4℃过夜或作用2h后进行接种。 第18页/共21页流感样病例实验室检测生物安全：BSL-2级及以上实验室具备病毒分离能力的实验室：利用状态良好的MDCK细胞进行病毒分离。MDCK细胞病毒分离阳性再用鸡胚进行病毒分离。?不具备病毒分离能力的实验室：收到标本后1周内利用核酸检测方法进行流感病毒亚型鉴定。检测结果在检测完成后48h内录入“中国流感监测信息系统”。第19页/共21页病毒分离方法常采用鸡胚和MDCK细胞分离方法流感病毒分离：生物安全二级实验室禽流感病毒分离：生物安全三级实验室正常细胞病变细胞第20页/共21页