RNA的提取和cDNA合成原理和实验方法宣贯.pdfVIP

RNA 的提取和 cDNA 合成原理和实验方法 第一节 . 概述 从真核生物的组织或细胞中提取 mRNA, 通过酶促反应逆转录合成 cDNA 的第一链和第 二链 ,将双链 cDNA 和载体连接 ,然后转化扩增 , 即可获得 cDNA 文库 ,构建的 cDNA 文库可用 于真核生物基因的结构、表达和调控的分析 ;比较 cDNA 和相应基因组 DNA 序列差异可确 定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之 cDNA 的合成和克隆已成为当今真核 分子生物学的基本手段。自 70 年代中叶首例 cDNA 克隆问世以来 ,已发展了许多种提高 cDNA 合成效率的方法 ,并大大改进了载体系统，目前 cDNA 合成试剂已商品化。 cDNA 合 成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成 cDNA 第一链 ,聚合酶合成 cDNA 第二链 ,加入合成 接头以及将双链 DNA 克隆到于适当载体 (噬菌体或质