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实验三十二 实验三十二 目的基因片段与载体的连接 (The Ligation of Target Gene and Vector ) 实验目的 • 学习DNA片段的连接方法，将酶切后的 PCR产物与质粒片段连接，构建重组DNA。 DNA重组 •DNA重组本质上是一个酶促生化过程， 是指将外源 目的基因片段通过DNA连接 酶的作用插入到质粒载体中的过程。 •DNA片段只有与载体重组并转入合适的 宿主细胞中才能进行复制。 DNA连接酶（DNA ligase ） • 主要有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠 杆菌DNA连接酶。 •E.coli DNA 连接酶 催化DNA分子连接 的机理与T4噬菌体DNA连接酶基本相同， 只是辅助因子不是ATP而是NAD+。 •T4噬菌体DNA连接酶 催化DNA连接反应 分为三步。 T DNA连接酶的作 4 用: ① T DNA连接酶与辅