CCK8操作说明与检测步骤.pdfVIP

如果对你有帮助，请下载使用！ DOJINDO操作说明 细胞活性检测 1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml / 孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在 37 ℃，5% CO2 的条件下 )。 2. 向每孔加入 10 ml 的 CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的 读数 ) 。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 5. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶液 或者 1% w/vSDS 溶液， 并遮盖培养板避光保存在室温条件下。 在 24 小时内吸光度不会发 生变化。 细胞增殖 -毒性检测 1. 在 96 孔板中配制 100 ml 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 ( 在 37℃， 5% CO2 的条件下 )。 2. 向培养板加入 10 ml 不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如 : 6,12, 24 或 48 小时 )。 4. 向每孔加入 10 ml CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的读数 ) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 7. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话， 可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶液或者 1% w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物 的影响。 当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基， 直接扣除培养基中加入药物后的空 白吸收即可。 制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如： 1/2 比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度， 一般要做 3-5 个细 胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。 3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D 值，制作出 一条以细胞数量为横坐标 (X 轴 ) ，O.D 值为纵坐标 (Y 轴 ) 的标准曲线。根据此标准曲线可以 测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细 胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间 )。 DOJINDO检测步骤 CCK-8检测步骤 1. 向各孔中加入 100 μl 细胞悬液。 a) 2. 在 37℃下预孵育培养板。 b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液 c)10 μl。 4. 37℃下孵育。 5. 向各孔中加入 10 μl 的 CCK-8溶液 d) 。 6. 37℃下孵育 1-4 小时。 e) 7. 测定 450 nm 处的 OD 值。 1 如果对你有帮助，请下载使用！ a) 使用适当的培养基制备 50,000-100,000 个/ml 的细胞悬液。 b) 建议使用 CO2培养箱过夜预培养。 c) 使用培养基或 PBS来制备溶液。