研究生实验二.pptxVIP

会计学;ELISPOT简介;ELISPOT技术的发展 ; 1996年以来随着抗体制备、PVDF膜等技术改良，ELISPOT 分析技术已经逐渐达到科研人员的期待，它已是当世公认最灵敏抗原特异性T细胞的体外检测技术。;ELISPOT与ELISA的比较;106抗原呈递细胞（APC）中混入特定数量的IFN-γ+的T淋巴细胞 ，经下列方法检测： ELISPOT 细胞内细胞因子染色（FACS） ELISA ;BD ELISPOT 技术优势;BD ELISPOT 应用;BD ELISPOT原理;BD ELISPOT 流程;3．细胞悬液加入Ag或有丝分裂素等刺激剂孵育一定时间以激活细胞――细胞分泌的蛋白紧靠在细胞周围，与已固定的捕获抗体结合;5．加入生物素标记的针对被分析物的检测抗体――检测抗体与被分析物结合，形成 ‘夹心三明治’复合物;第12页/共24页;Coating Ab 包被培养板;去除细胞，加入冰冻去离子水200ul/孔， 培养板置冰上10分钟 ;ELISPOT 结果显示;ELISPOT 结果显示;BD ELISPOT 结果分析;BD ELISPOT 操作注意事项1;5.背景过高的克服方法： 增加洗涤的次数。 在显色之前用PBS洗涤以去除Tween-20，防止对显色的干扰。 如果需要,增加干燥ELISPOT板的时间。 彻底洗去细胞减少非特异性斑点。 掌握好显色时间，防止过度显