酶活性的测定方法.docVIP

生物样品预处理 预冷解剖用具，采用颈后断头的方法将鱼杀死，立即取肝脏、腮、脑，操作均在4℃下进行，用预冷的0.15 mol/L KCl 溶液洗去血丝，用滤纸吸干后称重。 将肝、脑组织放入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 mol/L KCl)匀浆（匀浆比（W/V）1:5），腮组织放入组织匀浆（匀浆缓冲液含40mmol/L咪唑，250mmol/L蔗糖，5mmol/L EDTA，pH7.0），匀浆比为1:40，匀浆速率为10000g，以15s为周期，重复3次。 分别取1ml匀浆液放入1.5ml离心管进行离心，4℃下离心 (9000g，20min)，取上清液-80℃下保存，待测。 （1）250mL 0.15 mol/L KCl：取2.7956g （2）Tris-HCl缓冲液：125mL 0.1 mol/L Tris（1.5143g）+ 105mL 0.1 mol/L HCl+ KCl（0.15*0.23*74.55=2.5720g） （Na+＋K+）－ATPase活性的测定 1、试剂 （1）匀浆液（250ml）：40mmol/L咪唑 0.6808g+250mmol/L蔗糖 21.3931g+5mmol/LEDTA 0.3653g （2）反应缓冲液（250ml）：80mmol/L咪唑 1.3616g+4mmol/LMgCl2 0