核酸扩增技术.ppt

核酸扩增技术 关键内容 第一节 聚合酶链反应技术 第二节 荧光定量PCR技术 第三节 其她核酸扩增技术 第四节 临床基因扩增试验室管理与质量控制 第一节 聚合酶链反应技术 polymerase chain reaction, PCR 一、 PCR技术发展简史 二、 PCR技术原理 三、 PCR反应体系、条件及其优化 四、扩增产物检测及分析 五、 PCR常见问题与原因分析 六、PCR衍生技术 PCR技术发展简史 Korana于1971年最早提出核酸体外扩增设想。 1985年Mullis等发明了含有划时代意义聚合酶链反应, 使用DNA聚合酶是Klenow片段。 (1993年诺贝尔化学奖取得者) PCR技术发展简史 1988年初, Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR。 1988年Saiki 发觉Taq DNA聚合酶, 以后PCR技术得以广泛应用。 基础原理 N= N0(1+E)c PCR反应体系、条件及其优化 PCR反应体系 模板（template） 引物（primers） DNA 聚合酶 (DNA polymerase) dNTP PCR缓冲液（PCR buffer） PCR反应条件 变性 退火 延伸 循环 DNA RNA: 总RNA、mRNA、tRNA、 rRNA、 病毒RNA 基因组DNA 质粒DNA 模板（te