pH调整液 模板模板.docxVIP

PAGE PAGE 1 pH调整液 为了养分成分稳定和延伸储藏时光，在配制养分液时不预先加入NaHC03，而在用法前再加入。因此NaHC03都是单独配制，高压灭菌。此外，为了维持培养液恒定的pH，以利于细胞的生长和增殖，还可利用HEPES强缓冲液。 合成培养基大都呈弱酸性，而细胞生长的最适pH为7.0～7.2，可忍耐的pH范围是pH 6.6～7.8. pH到7.6时，细胞虽有代谢但不再分裂增殖，故用法培养基时要调节pH,并注重培养过程中的pH变幻，以准时换液。常用的pH调节液NaHC03,HEPES等配制如下：1. NaHC03溶液常用的浓度有7.4%,5.6%,3.7％三种。配制时用三蒸水溶解后，滤过除菌，分装小瓶，盖紧瓶塞，于4℃或室温保存。有的试验室用68 kPa 10分钟高压灭菌，虽有部分NaHC03被破坏，但操作容易便利，调整pH时，NaHC03要逐滴加入，并时常摇动培养液，以防止加入过量。当pH过高后，可用灭菌的10%醋酸溶液或通入C02气体调整。2. HEPES为了较长时光恒定pH，可用法缓冲能力较强的HEPES ( N-2-hydroxyeth-ylpiperazine N -2-ethanesulfonic acid, N-2-羟乙基哌嗪-N’-），用法的终浓度为10～50mmol/L，可以按照缓冲能力的要求而定。HEPES的分子式为：C8H1804N2S，分子量为238. HEPES可按所需的浓度挺直加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000m1培养液中加入2.38g HEPES，待溶后用1 mol/L NaOH调pH至7.0～7.2，滤过除菌后用法。此时HEPES的用法浓度为10mmol/L。亦可配成100×储藏液（1 mol/L )，用法前取99 ml培养液加入1 ml储藏液，终于浓度仍为l0mmol/L,1mol/L (100 ×) HEPES储藏液配制办法：取23.8g HEPES溶于100m1双蒸水中，用1 mol/L NaOH调pH至7.0～8.0后，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存。抗生素培养物的污染会使其变得含糊不清，污染微生物的生长彻低会压到，甚至杀死培养物的细胞，使细胞培养及其试验失败。在用人体和动物组织材料分别或培养细胞的过程中，污染可能性很高，在这种状况下于试液中加入适量抗生素，可预防操作不慎而产生的污染。但在细胞培养物是“整洁”的状况下，我们不推举常规地应用抗生素，也不主见用于细胞库的运作中。常用的抗生素有、、、、两性霉素B等。常配成100倍或200倍于用法浓度的盐溶液内，分装小瓶，冷冻保存。用法前加入到培养液内，每小瓶最好一次用尽。各种抗生素的用量及抗菌范围见表1-7。1．配制以青霉素、链霉素为例，配制如下：取（钠盐）100万IU和链霉素（双氢）1g(100万ug）溶于无菌三蒸水100m1，每毫升含10000IU，链霉素10 000 ug。2．保存分装小瓶，-20℃冰冻保存。3．用法99 ml培养液中加入青霉素、链霉素混合液1 ml，终于浓度为100U/ml,100 ug/ml。用法金霉素时须预热37℃的三蒸水溶解呈清亮的琥珀色。制霉菌素几乎不溶于水，故配制成混悬液。L-glutamin溶液制备：L-glutamin（分子量146.15)6g三蒸水 200m11.滤过除菌。2．分装。3.-20℃冰冻保存。4.用法时每l00ml培养液加1ml。