GE离子交换层析柱.pdf

GE 离子交换层析柱 protocol 5ml （举例 子） Preparation 1. Buffer: （pH 根据蛋白的 pI 进行调整， pH 尽量远离 pI 。pHpI, 过 Q 柱；pHpI, 过 S 柱） A: 50mM Tris-HCl B: 50mM Tris-HCl 1M NaCl 过滤除杂质， 4 ℃静置过夜除气泡。 2. Protein: 用 滤器过滤除质；或者分装于 EP 管， 14000rpm，4 ℃离心 20min ，去除 沉淀。 3 .Prepare enough tubes 有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中 !!! 柱子在仪器上时，无论何时均要限压 !!! Procedure 1 打开仪器总开关，电脑。 检查：泵的探头是否放入纯水中。 洗泵： Manual--pump--pump basic wash--A on ,B on--insert--execute 洗系统： Manual--pump--flow--10ml/min--insert--execute Manual--other--End time--volume--40 ml 2 安装柱子 给流速： Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute( 仪器显示系统压力为 *Mpa) 限压力： Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert--execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压 ) 装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。 3 清洗柱子 限压力： Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert-- execute 给流速： Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute （低流速下装柱子） Manual--other--End time--volume--10 ml （第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子， 必须先用 纯水 洗 以上。 CV：柱体积， 其中 Hitrap Q HP5ml 的 CV 是 5ml ） 停流速： End 装溶液：将 A 泵放入 buffer A, 将 B 泵放入 buffer B 。（必须在零流速下 操作 ） 限压力： Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert-- execute 低盐洗： Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute 清洗至基线走平（大约需要 20ml ） 高盐洗： Manual--pump--gradient--100%B--insert--execute Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute 清洗至基线走到平 低 盐 洗 ： Manual--pump--gradient--0%B--insert-- execute Manual--pump--flow--3ml/min-- insert--execute 清洗至基线走平 停流速： End 4 上样品 选择合适的上样环，例如 5ml loop. 用纯水清洗 loop 三次，再用 buffer A 清洗 loop 三次，赶走气泡；同时清洗上 样口。 将样