液相色谱柱的应用.ppt

液相色谱柱的应用;目 录;一、 HPLC分离原理;分配过程 ;分配系数 - K;容量因子k ;色谱理论：塔板理论--柱分离效能指标;色谱理论：速率理论--影响柱效的因素;色谱理论：速率理论--影响柱效的因素;色谱理论：分离度;样品组分的分离;液相色谱的基本流程图;HPG-3x00RS 泵 在整个流速范围下保持800 bar高压 最高流速达到5 ml/min WPS-3000RS 自动进样器 进样周期15 秒 进样阀耐压1000 bar TCC-3000RS 柱温箱 5-110 °C 温度范围 柱后冷却 DAD-3000RS检测器 全波长扫描范围数据采集速率100 Hz Acclaim? 2 μm色谱柱 耐压800 bar Chromeleon? CMS软件及时获得结果 ;高性能－UltiMate 3000 x2 三元梯度系统;液相色谱柱的应用;色谱柱的构造;色谱柱的构造; ;液相色谱柱的构造;色谱柱的构造;液相色谱柱的安装;液相色谱柱的安装;连接接管必须注意：;色谱连接注意事项;连接管线与接头;液相色谱柱的应用; 分离模式的选择; 1.填料：硅胶、氧化铝、聚苯乙烯等 2. 键合相： C4、C8、C18、苯基、氨基等（封端技术） 3.孔径：60-100A 分子量2000 300A 分子量2000 4.粒径：2um-10um 5.内径：10mm以下（分析），10mm以上（制备） 6.长度：10、15、25、30mm ;正相 反相色谱;正相色谱;反向色谱法;各种反相填料的使用比例;反向色谱法;流动相;不同混合溶剂的粘度比较;柱填料基质; 色谱柱的性能参数;色谱柱的物理性质;硅胶纯度;A型、B型硅胶比较;金属敏感测试;色谱柱子的尺寸;颗粒形状与大小;填料粒度;粒径的影响;粒径与柱效; 核壳U-HPLC的科学原理; 流速设定;色谱柱尺寸和填料粒径的影响;比表面积与孔径;比表面积的比较;比表面积与孔径的影响;大孔径填料适用于大分子分析;300? 孔径可改善蛋白质和多肽峰形;300? 孔径可改善大分子的峰形;色谱柱化学性质;键合类型;碳载量;碳载量;碳载量;封端技术; 固定相键合 二甲基硅烷 ;三基封端技术（酰胺基）;超临界封端技术;碱灭活测试;封端技术比较;保留值与pH的关系;保留值与pH的关系;pH值对保留时间的影响;保留值与pH的关系;复杂组分的流动相pH选择技巧;液相色谱柱的应用;色谱柱的评价;色谱柱的评价;溶剂前处理;溶???前处理;基线问题分析;液相色谱柱的使用;液相色谱柱的使用;液相色谱柱的使用;色谱柱柱内体积和平衡时间;液相色谱柱的使用;USP 允许调节的色谱条件范围;; 流动相调整的基本原则（等度）;样品溶剂溶解强度的影响;样品溶剂溶解强度的影响;缓冲液对中性物质的影响;增加缓冲液浓度减少拖尾;流动相pH值的选择;反相HPLC常用缓冲液;三乙胺对碱性成分峰形的影响;酸对酸性组分的峰形的影响;柱容量对峰型的影响 ;液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5μm UV: 254 nm 流速: 1 mL/ min. ;等度和梯度的影响;等度和梯度获得柱效不同;液相色谱柱的应用;色谱柱的保存;色谱柱的保存;色谱柱的维护保养;色谱柱易出现的问题;修补前后现象 ;样品问题;常见问题及解决方法;色谱柱子污染对比;色谱柱的修复;柱头塌陷修复办法;液相色谱柱再生;液相色谱柱再生;Thank You !