茶叶提取物中咖啡因含量的测定 .docxVIP

PAGE PAGE 1 茶叶提取物中咖啡因含量的测定 一、试验原理 当前茶饮料因其具有一定的保健功能而十分流行，其中主要的有效成分是茶叶提取物，茶叶（Tea）提取物中含有咖啡因（Caffeine)。是一种生物碱化合物，有提神醒脑的作用，是一种中枢神经高兴剂。同样含有咖啡因成分的咖啡、可乐等软饮料及能量饮料在市场上亦非常畅销，但长久、大量饮用有成瘾的趋势。此外，咖啡因也是世界上最普遍用法的精神药品之一，我国将咖啡因列为“精神药品”加以管制。咖啡因的测定办法以高效液相色谱法为主，通过色谱柱将咖啡因与样品基体组分分别，用紫外检测器测定其含量。在高效液相色谱法中应用最为广泛的是反相色谱，即流淌相的极性大于固定相。本试验以非极性的C18键合相色谱柱、极性的／水流淌相分别样品中咖啡因，用法紫外检测器，以色谱峰面积为定量分析指标，计算饮料中咖啡因的含量。二、主要仪器和药品高效液相色谱仪（C18反相键合相色谱柱4.6 mm x15 cm，微量注射器）、紫外检测器（波长254 nm)。流淌相：：水＝60:40，流速0.5 ml·min-1.（分析纯）、储备液（配制成咖啡因1000 mg·ml-1的甲醇溶液）、（色谱纯）、试验用水用法纯水机制取。三、试验步骤1．标准溶液配制将咖啡因储备液用甲醇稀释成浓度分离为20、40、80、120、160 mg·L-1的标准系列，备用。2．样品处理依据样品状态不同，实行相应的处理办法。常用的样品处理办法如下：①取100 ml液态饮料（特殊是可乐等碳酸饮料）于250 ml干燥烧杯中，经超声脱气5 min,驱除其中C02等气体，依其含量适当稀释。②精确?????称取固态咖啡0.25 g（精确?????至0.0001g)，水溶解，定容100.0 ml，摇匀备用。③精确?????称取茶叶0.3 g（精确?????至0.0001g) ,30 ml水煮沸10 min，冷却后将上清液转移至100 ml容量瓶中，重复上述过程两次，定容并摇匀备用。分离取上述试液5 ml，用0.22 um滤膜过滤，滤液置于洁净、干燥的具塞容器中，供色谱分析用。3．咖啡因含量测定(1)色谱条件的挑选预热仪器并系统初始化，柱温为室温， C18反相键合相色谱柱4.6 mm x15 cm，紫外检测器，波长254 nm；流淌相:水=60:40，流速0.5 ml·min-1；进样量为5ul。(2）咖啡因标准系列的测定待基线平稳后，分离取5ul浓度为20、40、80、120、160 mg·L-1标准系列进样，测量其峰面积；并重复一次，取其平均值，绘制标准曲线。(3)试液测定取制备好的试液5 ul，进样并测量其峰面积；并重复两次，取其平均值，计算含量。4．数据处理(1)绘制标准曲线按照标准系列峰面积数据与其浓度数据，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，并考察其线性关系。(2)计算样品中咖啡因的含量按照试样咖啡因峰面积数据，在标准曲线查出其咖啡因浓度，终于换算成原始样品中咖啡因的含量。四、注重事项试样的进样体积可按照其试样中咖啡因含量而调节。若含量较低，可以加大进样体积，以峰形对称、峰面积数值大约位于标准曲线中值处为宜。