第15章dna的生物合成和损伤修复.pptx

DNA的生物合成 和损伤修复 DNA Biosynthesis and DNA Damage Repair;DNA生物合成;染色体DNA复制的一般特征 The general features of replication of chromosomal DNA;一、DNA复制是半保留复制;密度梯度实验 ;双螺旋DNA复制时，复制区生长点的结构呈Y形或叉形，称之为复制叉。;三、DNA复制是双向复制;从一个DNA复制起点起始的DNA复制区域，它是一个独立复制单位，包括复制起点和终点。 ;前导链（leading strand）: DNA复制时，一条链的合成方向和复制叉前进方向相同，可以连续复制合成的新链。 后随链（lagging strand）:另一条链的合成方向与复制叉前进方向相反，不能连续复制，只能分成若干小片段分别合成，然后连接起来形成新链。后随链中的小片段称为冈崎片段（Okazaki fragments)。;;;复制起点（origin）：指DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。 ;E.coli 复制起始点 oriC;酵母复制起点为自主复制序列（autonomously replicating sequences，ARS）： ;复制起点的一般特征: ① 由多个独特的短重复序列组成。 ② 短重复序列被多亚基的复制起始因子所识别并结合。 ③ 一般富含AT，利于双螺旋DNA解旋，以产生单链DNA复制模板。;DNA聚合酶不能从游离的核苷酸开始合成DNA链，必须由引物（primer）提供自由的3?-OH末端，通过加入核苷酸使之不断延伸。 所有细胞和多数病毒的DNA复制，首先利用模板合成一段RNA引物，这一过程为引发（priming）。 RNA引物5?端的第一个核苷酸通常是pppA（个别为pppG）。;??174等噬菌体以双链环形DNA的一条链上产生切口处的3?-OH为引物； 腺病毒及某些线性DNA病毒以结合于病毒DNA的5?端磷酸基团的末端蛋白上的dCTP的3?-OH为引物开始复制。;DNA聚合酶 ：催化合成DNA DNA解旋酶（helicase）：解开DNA双螺旋，暴露复制模板链 引发酶 ：引发，即合成RNA引物，利用引物3’-OH开始延伸 DNA连接酶：连结冈崎片段 其它酶和蛋白因子;DNA聚合酶的合成前误差控制(presynthetic error control)和校正控制(proofreading control)功能。 细胞修复系统是DNA复制高度忠实性的重要因素。 复制起始利用引物也是确保DNA复制忠实性的重要机制之一。; DNA聚合酶的特征 Features of DNA polymerases;一、DNA聚合酶的底??是dNTP和引物-模板连接处;二、DNA聚合酶的活性中心催化DNA合成;三、DNA聚合酶半闭合右手结构有3个结构域;三个结构结构域的功能;DNA聚合酶合成的进行性（processivity）：即DNA聚合酶每次结合引物-模板连接处能够引入一定数目的核苷酸。 DNA聚合酶（核心酶）和一种可沿DNA滑动的DNA夹子（sliding clamp）蛋白质之间相互作用，可以进一步增强DNA聚合酶的进行性。;DNA聚合酶3??5?外切酶活性可以在新合成的DNA链的3’端去除错配的核苷酸。 ;DNA聚合酶手掌结构域与错配碱基、新进入的dNTP作用减弱，新合成的DNA链3?端的几何形状发生改变，DNA合成速度降低，3??5?外切酶活性增加； 错配的DNA对聚合酶活性中心的亲和力降低，引物-模板连接处从聚合酶活性中心滑动到3??5?外切酶活性中心。 错配的碱基被消除后，正确配对的引物-模板连接处又滑动回到聚合酶活性中心，继续合成DNA。;大肠杆菌DNA复制 DNA replication in E. coli;一、在复制起点解旋酶和多种因子形成复合物;;结合oriC的4个9bp反向重复序列形成复制起始复合物。 作用于oriC的3个13bp正向重复序列，DNA在这3个位点解链，形成开放型复合物（open complex）。;5??3?解旋酶作用产生两条复制模板链 激活引发酶DnaG蛋白 DnaB蛋白与引发酶结合，形成引发体;使一条DNA链围绕着另一条旋转，消除解旋产生的张力。;E.coli 中DnaB结合引发酶DnaG，催化合成RNA引物，其序列始于pppAG，模板链序列3?-GTC-5?，引物长度一般11~12个碱基。;负责切除RNA引物。;;２个核心酶 1个?-复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 可滑动的DNA夹子（含1对?-亚基）;?亚基（130 000）主要功能是合成DNA ?亚基具有3??5?外切酶活性（校正功能