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第15章dna的生物合成和损伤修复.pptx

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DNA的生物合成 和损伤修复 DNA Biosynthesis and DNA Damage Repair;DNA生物合成;染色体DNA复制的一般特征 The general features of replication of chromosomal DNA;一、DNA复制是半保留复制;密度梯度实验 ;双螺旋DNA复制时,复制区生长点的结构呈Y形或叉形,称之为复制叉。;三、DNA复制是双向复制;从一个DNA复制起点起始的DNA复制区域,它是一个独立复制单位,包括复制起点和终点。 ;前导链(leading strand): DNA复制时,一条链的合成方向和复制叉前进方向相同,可以连续复制合成的新链。 后随链(lagging strand):另一条链的合成方向与复制叉前进方向相反,不能连续复制,只能分成若干小片段分别合成,然后连接起来形成新链。后随链中的小片段称为冈崎片段(Okazaki fragments)。;;;复制起点(origin):指DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。 ;E.coli 复制起始点 oriC;酵母复制起点为自主复制序列(autonomously replicating sequences,ARS): ;复制起点的一般特征: ① 由多个独特的短重复序列组成。 ② 短重复序列被多亚基的复制起始因子所识别并结合。 ③ 一般富含AT,利于双螺旋DNA解旋,以产生单链DNA复制模板。;DNA聚合酶不能从游离的核苷酸开始合成DNA链,必须由引物(primer)提供自由的3?-OH末端,通过加入核苷酸使之不断延伸。 所有细胞和多数病毒的DNA复制,首先利用模板合成一段RNA引物,这一过程为引发(priming)。 RNA引物5?端的第一个核苷酸通常是pppA(个别为pppG)。;??174等噬菌体以双链环形DNA的一条链上产生切口处的3?-OH为引物; 腺病毒及某些线性DNA病毒以结合于病毒DNA的5?端磷酸基团的末端蛋白上的dCTP的3?-OH为引物开始复制。;DNA聚合酶 :催化合成DNA DNA解旋酶(helicase):解开DNA双螺旋,暴露复制模板链 引发酶 :引发,即合成RNA引物,利用引物3’-OH开始延伸 DNA连接酶:连结冈崎片段 其它酶和蛋白因子;DNA聚合酶的合成前误差控制(presynthetic error control)和校正控制(proofreading control)功能。 细胞修复系统是DNA复制高度忠实性的重要因素。 复制起始利用引物也是确保DNA复制忠实性的重要机制之一。; DNA聚合酶的特征 Features of DNA polymerases;一、DNA聚合酶的底??是dNTP和引物-模板连接处;二、DNA聚合酶的活性中心催化DNA合成;三、DNA聚合酶半闭合右手结构有3个结构域;三个结构结构域的功能;DNA聚合酶合成的进行性(processivity):即DNA聚合酶每次结合引物-模板连接处能够引入一定数目的核苷酸。 DNA聚合酶(核心酶)和一种可沿DNA滑动的DNA夹子(sliding clamp)蛋白质之间相互作用,可以进一步增强DNA聚合酶的进行性。;DNA聚合酶3??5?外切酶活性可以在新合成的DNA链的3’端去除错配的核苷酸。 ;DNA聚合酶手掌结构域与错配碱基、新进入的dNTP作用减弱,新合成的DNA链3?端的几何形状发生改变,DNA合成速度降低,3??5?外切酶活性增加; 错配的DNA对聚合酶活性中心的亲和力降低,引物-模板连接处从聚合酶活性中心滑动到3??5?外切酶活性中心。 错配的碱基被消除后,正确配对的引物-模板连接处又滑动回到聚合酶活性中心,继续合成DNA。;大肠杆菌DNA复制 DNA replication in E. coli;一、在复制起点解旋酶和多种因子形成复合物;;结合oriC的4个9bp反向重复序列形成复制起始复合物。 作用于oriC的3个13bp正向重复序列,DNA在这3个位点解链,形成开放型复合物(open complex)。;5??3?解旋酶作用产生两条复制模板链 激活引发酶DnaG蛋白 DnaB蛋白与引发酶结合,形成引发体;使一条DNA链围绕着另一条旋转,消除解旋产生的张力。;E.coli 中DnaB结合引发酶DnaG,催化合成RNA引物,其序列始于pppAG,模板链序列3?-GTC-5?,引物长度一般11~12个碱基。;负责切除RNA引物。;;2个核心酶 1个?-复合物(?、?、??、?、?、? 6种亚基) 可滑动的DNA夹子(含1对?-亚基);?亚基(130 000)主要功能是合成DNA ?亚基具有3??5?外切酶活性(校正功能

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