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氨基酸分析方法及仪器比较 一、氨基酸分析方法分类 氨基酸分析按其分离和检测方法的不同可分为三大类型。第一类是基于阳离子交换柱分离、 柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（ IEC）。此类方法由 Stein 和 Moore 两人 1958 年发明， 并于 1972 年获诺贝尔奖， 是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。 第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（ HPLC）。第三 类是阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法 IC ，严格说来，阴离子交换和阳离子交 换都叫“ IEC”，在此将阴离子交换分离、安培检测的方法归类为 IC ，是因为这类仪器实际 上就是离子色谱仪，只不过配置侧重点为氨基酸分析。本文中对三类方法多用简称。 说明： 1、PITC 异硫氰酸苯酯； OPA邻苯二甲醛； FMOC9- 芴基甲氧羰酰氯； AQC6- 氨基 - 喹啉基 -N- 羟基琥贝酰亚胺 - 氨基甲酸酯； DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。 2、IEC 法也可使用柱后 OPA衍生（荧光检测），可以降低检测限到 1pmol，但无法检测二级 氨基酸。 二、用户如何选择适合自己的方法和仪器 氨基酸分析的方法和仪器多种多样， 用户应该根据自己的实际应用情况和发展趋势来选择方 法和仪器。选择时可参考以下几个方面： 1、是否需要对分析结果负责（如对外出具报告等） IEC 仪器使用茚三酮柱后衍生法，符合国家标准和国际仲裁标准，而 IC 法和 HPLC法虽然总 体性能也比较稳定可靠， 但其测量结果与茚三酮法有较大差异， 且结果难以长期重复， 这对 于仲裁不利。目前， IC 法和 HPLC法分析氨基酸一般仅用于不太深入的研究，而且主要是利 用其灵敏度较高的特性。 也有部分企业用来做内部质量控制（国家没有制定相关标准） ，但 如果要考虑对外做样并出具结果报告， IEC 仪器是唯一选择。由于国内的氨基酸分析呈现急 剧上升的势头， 而很多单位经济能力有限， 因此也确有不少单位购买专用氨基酸分析仪作为 创收手段。 2、一次进样需要出峰的数量是多还是少 氨基酸种类繁多、 性质接近， 因此氨基酸分析是色谱界公认的难题， 尽管现在有多种多样的 方法，但没有任何方法能够保证所有氨基酸峰能够一次进样完全的分离。 仅仅从分离程度来 说，好的 HPLC方法最多可以一次分离检测 20 种左右的氨基酸峰， IC 法最多可一次分离检 测约 30 种氨基酸峰（理论上说来， IC 法可达到与 IEC 法相当的出峰数量，但金电极的基线 漂移较大，保留时间太长的峰就难以定量分析）， IEC 法最多一次可分离检测 50 种左右的 氨基酸峰。从这个角度来说，如果您需要分析游离氨基酸样品，就应当选择 IEC 仪器。 3、氨基酸分析频率高还是低 氨基酸样品分析频率如果达到每个星期至少 1 次，就可以算“频率较高”， 少于每周 1 次就 可以说是“较低”。 频率较高时，应当仪器专用化 （即便是用 HPLC和 IC 法，也应专用于氨 基酸分析） ，因为反复更换柱子和缓冲体系不仅麻烦、平衡时间长，难以保证分析结果的可 靠性和重复性，而且容易损坏仪器。 4、氨基酸样品总量是多还是少 总体的成本应考虑到做样成本，而不能只看仪器本身。 HPLC做氨基酸分析时，每根柱子只 能进样 100～500 针，而 IEC