大鼠肝细胞分离培养 .docxVIP

PAGE PAGE 1 大鼠肝细胞分离培养 肝实质由大量肝细胞与少量间质细胞组成，试验用肝细胞以获得高纯度肝实质细胞是极为重要的。肝实质细胞可用组织块法和原位灌注消化法收获肝细胞举行原代培养，组织块法易于贴壁，容易易行，细胞生长良好，普通次日就有新细胞从组织块周边长出，但此法不能猎取大量肝细胞。肝脏原位灌注消化法是从门静脉或其分支中插管，用胶原酶灌注使纤维组织网被消化，组织间衔接被解除，便可获得大量肝细胞悬液。再将肝细胞接种在游离飘荡的胶原薄片上，以增大细胞吸取养分物质的面积，达到模拟体内生长在基膜上的效果。肝脏为机体物质代谢的中央脏器，肝细胞形态规整，有多种功能，适于做各种试验讨论，用肝脏可对多种代谢的调整举行讨论。 【材料】1．组织来源 大鼠（体重180～200g);2．培养基与试剂 PRMI 1640培养液、胶原凝胶、FCS, CMF-PBS液、CMF-Hepes缓冲液、（I型、300U/mg，用法浓度为0.025% ),0.05％和0.025 % EDTA混合消化液，牛血清清蛋白（BSA)、、F12培养基等；3．器具 蠕动泵、聚乙苯烯管，硅化管（用作导管，外径1.5～2.Omm，端口部斜切）；输液夹，恒温水浴箱，细胞滤过器（内径48 mm，分60,150目网孔二段滤过）；50m1刻度离心管、低速冷冻离心机，氧气瓶等。手术器材、镊子（有齿及前曲无