大鼠胰岛细胞培养法 .docxVIP

PAGE PAGE 1 大鼠胰岛细胞培养法 胰岛散在于胰外分泌组织中呈岛状，是由数千个细胞组成的小器官。惟独分别、收集胰岛才有可能解析其固有功能。胰岛从外分泌腺组织中分别称胰岛单离，尽管已建立了多种办法，但获得较高纯度的胰岛细胞仍较困难。胰岛细胞培养的应用极为广泛，如胰岛细胞代谢、细胞分泌激素及激素合成机制的解析，细胞表面抗原，细胞受体及细胞带电现象的讨论，胰岛肿瘤化及对其有害药物的讨论，以及胰岛移植的应用等。 【材料】1．胰岛单离法(1）组织来源：大鼠（250g左右）1～2只。(2)试剂：Hanks液；胶原酶Ⅳ, I型或V型）；或。(3）器具：各种吸管，试管（吸管与试管最好硅化处理），35 mm塑料培养皿，玻璃蒸发皿（约50 mm左右）。解剖器具一套，20m1注射器，针头接4号静脉导管或21～23G翼状头皮针头，弥漫Hanks液。恒温振荡器（180～200r/min )。2.胰岛收集法(1)胶原酶消化后的胰组织。(2) Ficoll-Conray液：如表4-2制备450ml A液，然后应按A→D→C→B挨次，分离制备B,C,D液。A液：Fico11400终浓度8.3%,conray400（碘他拉酸钠Sodium iotalamate 66.8%溶液）终浓度11.1%，加lmg/ml，50ug/ml,0.002％等制成水溶液，高压灭菌后用Na