大鼠心脏细胞的制备与培养 .docxVIP

PAGE PAGE 1 大鼠心脏细胞的制备与培养 新生鼠心脏细胞不具备繁殖能力，故不行能传代，只能利用原代培养物。心脏细胞培养物易受培养技术水平及处理条件的影响，例如，新生鼠心肌组织对酶消化处理极其敏感。心肌细胞培养碰到的另一个普遍的问题是成纤维细胞的污染，繁殖的成纤维细胞能很快从数量上压倒心脏细胞并可能影响到心脏细胞的分化，由于成纤维细胞普通比心脏细胞更易贴壁。若需长时光培养心脏细胞，应施以诸如（ ethidium bromide, EB) ,溴脱氧尿昔( bromodeoxyuridine, BrdU）等化学处理，用法不同的血清，如牛血清，能降低成纤维细胞的繁殖速率也能增强心脏细胞的收缩性能。另外，应考虑的问题是合适的接种密度，以保持健康跳跃的培养物。心脏细胞培养物的伸缩性似乎和细胞与细胞之间接触有些关系，尽管形成一个融合成片的心脏的单层培养物极其困难。借助于化学处理，如施以去甲肾上腺素，或加入牛血清可以提高细胞的伸缩性。 【材料】1．组织来源幼鼠(0～1日龄Sprague Dawley幼鼠)20～25只。2．培养基与试剂(1）消化液：90％加Earles盐液的MEM，加10% FBS,O.1 %；(2）盐水A：137mmol/L NaC1,4mmol/L KC1,4.2mmol/L NaHC03、5mmol/L；(3）接种培养基：90％加Ea