基因工程的载体和工具酶.pptVIP

（二）M13噬菌体 1、丝状噬菌体M13噬菌体的生物学特性 ⑴是单链闭合环状噬菌体 只能感染雄性细菌，外形成丝状，基因组DNA长约6.4kb，含9个编码10种蛋白质的重叠基因，基因Ⅰ-Ⅷ可分为10个区和基因Ⅱ、Ⅳ之间有507 bp基因间隔区（IS区），该区可以接受外源DNA的插入而不会影响到噬菌体的活力。这是该噬菌体能用于单链DNA载体的重要前提。 ⑵复制与增殖（图） 第三十一页，共79页 M13噬菌体的复制与增殖 “＋”DNA CP CP脱落， “＋”DNA复制 RF－DNA “θ”型复制 积累200～300份 滚环复制 ＋ SSB 外溢时被包装 M13噬菌体 基因Ⅱ 基因Ⅴ 第三十二页，共79页 2. M13噬菌体载体的构建 这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的DNA。其最大的不足在于插入大的DNA片段后表现不稳定，在噬菌体增殖过程中容易发生缺失。所以一般克隆的片段在1kb之内，克隆300-400bp的片段十分稳定。 ⑴ 在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段 所以能通过?互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等。 第三十三页，共79页 （三）柯斯质粒载体（cosmid vectors） 柯斯质粒载体的特点 柯斯质粒是一类人工构建的含