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破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定 1 1 资料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：抗温和气单胞菌单克隆抗体的制备及初步鉴定 5 1 材料和方法 6 2 结果 7 3 讨论 7 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 10 正文 破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定 文1：破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定 【ABSTRACT】 Objective: To establish and prepare hybridoma cell line secreting monoclonal antibody (McAb) agait tetanic toxoid, to develop a rapid assay for Tetanus and investigate the pathogenesis of the virus. Methods: BALB/c mouse was immunized by purified tetanic toxoid. Hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (McAbs) agait tetanic toxoid were screened after the fusion of mouse splenic cells with SP2/0 cells. The Ig subtypes and titer of the McAbs were assayed with EL ISA and Westernblot assay. Results: After cell fusion and subcloning, three hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies specifically agait tetanic toxoid were obtained, and respectively named as 1E12, 1E11 and 1G10. Indirect EL ISA and Westernblot assay showed that the McAbs 1E12, 1E11 and 1G10 could specifically recognize tetanic toxoid. Conclusion: The specific antitetanic toxoid McAbs are developed and these McAbs may be useful in the development of detection assay and basic research of the pathogenesis of Tetanus. 【KEY WORDS】 Tetanic toxoid; Hybridoma cell line; Monoclonal natibodies 破伤风梭状杆菌是引起破伤风的病原菌，当机体受到外伤，创口被污染，或分娩时使用不洁器械剪断脐带等，本菌可侵入局部创面而引起外源性感染，发芽繁殖，释放毒素,在 发展 中国 家，新生儿破伤风死亡率可高达90%。目前对破伤风的诊断主要根据典型的症状和病史。单克隆抗体用于诊断感染性疾病具有灵敏度高、特异性强的特点，在许多疾病的诊断中已得到广泛应用。本实验首次成功制备破伤风类毒素单克隆抗体，为单抗应用于破伤风的临床诊断奠定了基础。 1 资料与方法 1．1 试剂、毒素、细胞与实验动物 破伤风类毒素由北京生物制品监定所提供。福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂购自北京市普京康生物工程技术有限公司。BALB/C小鼠购自首都医科大学动物室。SP2/0细胞由北京肿瘤研究所惠赠。聚乙二醇（PEG，MW1000，）为天津天泰精细化学品有限公司产品。HAT为美国GIBCObrL公司产品。羊抗鼠IgG酶标抗体为北京天象鑫龙生物医学科技有限公司进口分装产品。 小鼠免疫 雌性、6周龄、17ｇ左右BALB/C小鼠，后腿肌肉及背部皮内注射破伤风类毒素免疫，第一次100μg加等量福氏完全佐剂，3周后用100μg加等量福氏不完全佐剂，7周后500μg不加佐剂腹腔注射，腹腔注射后第4天进行细胞融合。 1．3 细胞融合 腹腔注射后第4天取BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在50%聚乙二醇作用下融合。融合后的杂交瘤细胞用含20%进口胎牛血清的HAT选择性培养基混均加入种有饲养细胞的96孔板中培养，2