生化与分生实验课件dna体外重组技术1st.pptxVIP

DNA体外重组技术 ;概念;步骤 ;;一、目的基因的获得 ;二、载体的选择 ;常用载体;三、连接 ;四、转化;五、筛选 ;;(一)根据重组子的遗传学特性筛选(平板筛选) 1.插入失活 2.插入表达 3.营养素依赖表型 4.α-互补(蓝白斑筛选法) (二)限制酶图谱筛选(电泳筛选法) (三)核酸杂交筛选 (四)免疫化学筛选;分子生物学实验安排;质粒概念：细菌染色体之外、能够独立复制、可赋予 宿主细胞一定生物学性状的共价闭环双链DNA。特性: 双链、闭合环状DNA，1-200kb； 常含有编码某些酶的基因?? 分型：严紧型与松弛型。 构型：超螺旋型SC---结构致密跑得快电泳时最快。 开环型OC---体积最大,不易从胶孔中穿过。 线型LC---居中。 分离: 将质粒与细菌的染色体DNA、RNA、蛋白等分离。 碱裂解法、煮沸法、去污剂法等。;;碱裂解法抽提质粒DNA的原理;操作流程;;;琼脂糖凝胶电泳;琼脂糖凝胶电泳优点 1.双重效应：电泳效应、分子筛效应。 2.操作简单，电泳速度快，样品无需预处理。 3.电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 4.凝胶透明且无紫外吸收，可在紫外灯下观看结果。 5.易染色，易洗脱，便于定量。 琼脂糖凝胶电泳一般用于核酸