细胞工程与其在食品工业中应用.pptVIP

细胞工程与其在食品工业中应用;第一节 概述;细胞工程;第二节 细胞培养技术;一、植物细胞培养技术; 植物细胞培养： 指在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过传代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。;（二）植物细胞工程理论基础;2 细胞分化与脱分化;2-2 细胞脱分化与组织培养 组织培养(tissue culture) 指通过无菌操作分离出植物体的一部分接种到培养基上，在人工控制条件下(包括温度、湿度、??照等)进行培养的过程。 ?外植体(explant)：通常指被培养的上述植物离体部分。;脱分化：植株上已经分化的细胞或组织离体后在培养条件下逐渐恢复到分生状态的过程。 愈伤组织：细胞脱分化的结果通常是形成愈伤组织（未分化的细胞团）。 已经脱分化的细胞或组织在一定条件下，它们又可以经过胚状体(由体细胞形成的类似合子胚的结构)或愈伤组织再分化出芽和根，从而发育成一个完整的植株，因为在细胞的基因中，除了全套的结构基因外，还有操纵基因，使结构基因不能启动而无法工作。激素则是在一定条件下能打破操纵基因的控制，使结构基因活化。因此，它直接影响和控制细胞的分化。;（三）植物细胞培养基;（四）愈伤组织和悬浮细胞培养技术;;1 步骤 选择细胞株，一般选择次生代谢物含量高的植物种类、品种或某一高产植株，利用外植体诱导出愈伤组织。 将愈伤组织转移到液体培养基中，建立悬浮细胞培养株， 并从中筛选出目标产物产量高、性能优良的无性繁殖系。 扩大培养，即把选出的“种子”接种到通气搅拌罐或进一步放大到几百升至几立方米的生物培养器中。;注意： 由于植物细胞培养的目标产物都属于次级代谢产物，要在细胞生长的后期才开始合成。因此，为了让产物产量高，一般采用二步培养法： 即使用生长培养基使细胞大量增殖，达到了一定的细胞密度，然后再改用适合细胞产物积累的培养基，促进细胞启动 次级代谢途径并提高产物的产量;2 培养条件 （1）物理因素 光：根据植物细胞而定 温度：25 ℃左右 PH值：5～6 （2）化学因素 溶氧：植物细胞悬浮培养是好氧过程，但植物细胞的呼吸率低。选择合适溶氧度 培养基：有机碳源、含氮盐类（有时加入有机氮）、植物激素（IAA和2，4－D等）;3.植物细胞培养的细胞生理特性;; 解决对策 剪气力敏感——在减少流体剪切力和满足植物细胞良好混合之间的寻求平衡 易染菌——反应器要加强密封性，防止污染 细胞生长与次级代谢产物积累无关联——在培养基中分别进行细胞增殖和代谢物积累，或采用固定化物来控制细胞处于只积累目的代谢物的理想状态;4. 植物细胞培养工业化存在的问题 生长缓慢 次级代谢物含量低 培养细胞不稳定等 多数产物积累于胞内 不耐受剪切力 一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。;（五）单细胞培养技术;;单细胞培养的程序： 建立细胞株 ↓ 高产细胞株的选择 ↓ 分化培养或扩大培养 ↓ 鉴定和提取;（六）提高植物细胞次级代谢产物含量的方法;;二、动物细胞培养技术;动物细胞培养一般程序; 1、动物细胞培养过程 2、应用：;原代培养： 传代培养： 细胞株： 细胞系：;3、植物组织培养和动物组织培养的比较;培养液 种类:液体培养基 成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、 维生素和动物血清等 ;一、细胞融合的定义 细胞融合（cell fusion)，又称体细胞杂交（somatic hybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜 融合形成单个细胞的过程。;Muller于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。 Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。 Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。 Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。 Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细胞合并现象。 1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。 1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。 1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 20世纪80年代出现了电融合技术。;生物种类;植物融合细胞成长状态对比,右瓶为地面融合的细胞，左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞 ;动物细胞融合实验使用的小白鼠 ;三、动植物细胞的融合过程;四、细胞融