大肠杆菌培养和分离第一课时.ppt

大肠杆菌培养和分离第一课时 2、特点：结构,形体的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物. 3、种类 病毒 原核生物：细菌、放线菌 真菌：酵母菌 原生动物 一、微生物及特点 1、微生物：一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 二、关于细菌 1、基本结构 2、分裂方式 3、生殖类型 4、变异类型 5、在基因工程中的应用 1、细菌的外形 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌 2、细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养型: 异养型: 光能自养型:光合细菌 化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌 大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌 寄生菌 ： 腐生菌： 3、细菌的革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 1、 培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，提供微生物生存的环境和营养物质。 2、培养基的成分 三、细菌的培养 碳源、氮源、生长因子、无机盐、水 细菌喜荤，霉菌喜素 细菌培养基：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠 酸碱度：中性偏碱 霉菌培养基：无机物或者添加蔗糖的麦芽汁 酸碱度：中性偏酸 3、培养基的类型 a.按照培养基的形态 固体培养基： 液体培养基： 半固体培养基： 分离细菌，保留菌种等 培养细菌 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基：菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 b.按培养基成分 合成培养基：成分明确 天然培养基：成分不明确 c.按培养基功能 1、基础培养基（LB培养基）：含有一般细菌生长的基本营养物质。 2、营养培养基（加富培养基）：在基础培养基的成分上添加某些特殊营养物质，如血清或者生长因子，用以培养对营养要求高的微生物。 50mL液体LB培养基： 蛋白胨0.5,酵母提取物，氯化钠，水50mL (固体培养基再加1g琼脂) 3、选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 4、鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或者化学药品，用于鉴别不同种类的微生物。 如：尿素固体培养基可以分离以尿素为氮源的微生物 如：伊红和美蓝与大肠杆菌代谢产物结合可以使菌落呈深紫色并带有金属光泽，可以用来鉴别大肠杆菌。 四：无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 成功地培养微生物的关键。 （１）消毒定义： 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 消灭病原微生物的过程。 是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括所有细菌的繁殖体、芽胞、孢子），达到完全无菌的过程。 3、常用消毒方法 1、对接种室、接种箱或者超净工作台可用紫外线进行物理消毒,然后用酒精进一步消毒 2、实验操作者的双手使用酒精进行消毒。 1、灼烧灭菌 灭菌的方法： 4.常用的灭菌的方法 2、高压蒸汽灭菌：压力：1kg/cm2 温度：121 ℃ 时间：15min. 培养皿、试管、三角瓶、移液管、枪头、三角刮刀、接种环、无菌水、培养基 高压蒸汽灭菌不会破坏培养基的成分。 1.无菌技术有什么好处？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 1、避免实验室培养物被杂菌污染 2、避免操作者自身被微生物感染。 （1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 思考： 四、细菌的分离 分离方法:划线分离法、涂布分离法 划线分离法：方法简单 涂布分离法：单菌落更容易分开，但操作复杂 分离目的：得到单菌落 是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 平板划线的操作 不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。 1.旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 2.是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h 1、上述操作过程中，接种环有哪些灼烧过程？ 思考： 2、各次灼烧的目的分别是什么？ 3、划线结束后，