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高二下册生物微生物的实验室培养期中复习要点 高二下册生物微生物的实验室培养期中复习要点 PAGE / NUMPAGES 高二下册生物微生物的实验室培养期中复习要点 高二下册生物微生物的实验室培养期中复习要点 2019 一、配制时的质量控制 (1)容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性， 无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏 试验结果。 (2)成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。 特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验 (O/F 试验 )，除加入葡萄 糖外，不能含有其他糖类， 指示剂不能用乙醇溶液， 避免 O/F 试验的 假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。 (3)pH 值调整：根据培养基的不同要求调整 pH 值，控制在要求范围 的 0.2 之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其 pH 值降低 0.1～0.2， 故矫正时应比实际需要 pH 值高 0.1～0.2。 (4)灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌 方式，既要达到灭菌效果， 又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养 基，如 MH 琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即 121℃15min 而含糖的 培养基则以 108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血 清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。 (5)分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平 皿、试管要求清洁，不残留酸碱 ;制备平板培养基时，操作台要水平， 以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。 二、配制后质量控制 第1页/共3页 (1)培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现 培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象， 必须丢弃。 (2)无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分 装的培养基，可采用抽样方法试验，少于 100 个样本通常选取 5%～ 10%的量，如果配制大量培养基，则任意选取 10 个培养基 ;无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在 35℃或其他适宜的温度下隔夜培养，如培养基含有血液，则需再置于室温 1 天，以检查嗜冷菌。选 择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多微生物，因此，可加入 10 倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。 (3)性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质 的库存菌种进行性能测试。 培养基按目的不同可分为增菌培养基、 分离培养基和鉴定培养基。 ①增菌培养基： 接种少量难以生长的细菌， 在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生 长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成 0.5 麦氏浊度的菌悬液，再用 0.001ml 的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。 ③鉴定培养基： 应选择具有典型特征的菌株作性能试验。 如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、 福氏志贺菌及铜绿假单胞菌 3 种菌分别 第2页/共3页 接种 3 支培养基，若反应结果为斜面产酸 /高层产酸、硫化氢阳性， 斜面产碱 /高层产酸，斜面产碱 /高层产碱，质量才算合格。 第3页/共3页