脱落酸(aba)对气孔运动的影响实验备考复习.docxVIP

ABA对拟南芥气孔运动的影响 左 【实验目的】 了解气孔开闭对植物的意义。 了解气孔开闭的调控机制。 验证脱落酸（abscisic acid, ABA）促进气孔关闭，抑制气孔开放。 【实验原理】 气孔（stomata），叶、茎及其他植物器官上皮上许多小的开孔之一，高等陆地植物表皮 所特有的结构。气孔通常多存在于植物体的地上部分，尤其是在叶表皮上， 在幼茎、花瓣上 也可见到，但多数沉水植物则没有。 狭义上常把保卫细胞之间形成的凸透镜状的小孔称为气孔。 保卫细胞区别于表皮细胞是 结构中含有叶绿体， 只是体积较小，数目也较少，片层结构发育不良， 但能进行光合作用合 成糖类物质。有时也伴有与保卫细胞相邻的 2—4个副卫细胞。把这些细胞包括在内是广义 的气孔（或气孔器）。紧接气孔下面有宽的细胞间隙（气室） 。气孔在碳同化、呼吸、蒸腾作 用等气体代谢中，成为空气和水蒸汽的通路， 其通过量是由保卫细胞的开闭作用来调节， 在 生理上具有重要的意义。 脱落酸（abscisic acid, ABA）是由 PF.Wareing和 F.T.Addicott于 1967 年命名的。ABA是异 戊二烯为基本单位的倍半萜羧酸，也是一种重要的植物激素 ，受到生物胁迫和非生物胁迫的 调控，在植物对胁迫耐受性和抗性中发挥着重要作用。在胁迫条件下 ,ABA调控了气孔关闭和 基因表达。在拟南芥、豌豆等植物的保卫细胞中 ABA能够诱导H2O2和NO的产生，在胁迫条 件下，二者作为信号分子调控了促进气孔的关闭的生理过程。在干旱条件下 ，植物体内的ABA 含量增高,ABA促进了开放的气孔关闭和抑制了关闭的气孔开放 ，最终结果是关闭气孔，从而 降低了植物水分的蒸发。Stomatal Open!ngAHA 141AKTtKAT1AKT2A3A(KC1NO3jNRT1 1 降低了植物水分的蒸发。 Stomatal Open!ng AHA 141 AKTt KAT1 AKT2A3 A(KC1 NO3j NRT1 1 (CHU} S Io mat al Closure CyGk; njcleotde Qdted GLR3^ 牡^transporter Figure 1 气孔开闭的调控(S. Pa ndey, et al. 20007) ABA调控气孔开度的模式为：①ABA与其保卫细胞上受体相结合；②ABA调控 了保卫细胞细胞质中 CR浓度的增加；③胞质中CR浓度的增加抑制了质膜上的 H+泵;抑制了控制k内流的通道；激活了控制Cl -外流的通道,最终导致质膜的去 极性化;④质膜的去极性化激活了控制外流的通道，进一步抑制了控制 K+内流的 通道；⑤ABA引起了胞质中pH的升高；⑥胞质中pH的升高激活了控制K+外流的通 道，抑制了质膜上的H+泵；⑦^和Cl -由液泡进入胞质中。以上步骤的结果即是保 卫细胞中《和Cl-流出胞外,保卫细胞的膨胀程度降低,气孔关闭。 【实验材料、试剂】 拟南芥(46天)完全展开的年轻叶片、 开放缓冲液 opening solution (10 mM KCl, 7.5 mM iminodiacetic acid, 10 mM Mes-KOH, pH 6.15) 闭合缓冲液 closure solution (20 mM KCl, 1 mM CaCl 2, 5 mM Mes-KOH, pH 6.15) ABA酒精溶液 【操作步骤】 1、ABA促进拟南芥气孔关闭 在培养板上取2个孔，加入关闭缓冲液。 拟南芥叶片下表面浸于开放缓冲液中， 置于强光下1小时，使气孔开放。 其中一个孔加入 50 MM ABA，即Close_ABA,另一个做参照，即 Close_ethanol 置于黑暗中1小时，观察拍摄气孔，统计孔径。 2、ABA抑制拟南芥气孔开放 在培养板上取2个孔，加入开放缓冲液。 拟南芥叶片下表面浸于开放缓冲液中， 置于黑暗中1小时，使气孔关闭。 其中一个孔加入 50 MM ABA，即Open_ABA另一个做参照，即 Open_ethanol。 置于强光下1小时，观察拍摄气孔，统计孔径。 【实验结果】 ABA调控拟南芥气孔的运动，使气孔关闭，见 Figure 2 s Close_ABA Closeethanol Figure 2 ABA促进拟南芥气孔关闭 ABA抑制拟南芥气孔开放 Close_ethanol, ABA促进拟南芥气孔关闭的对照组，孔径 6.10卩m，标准差1.47卩m, Close_ABA,实验组,孔径2.73卩m,标准差1.10卩n与对照组有极显著差异， p值为1.65174E-43 ; Open_ethanol, ABA抑制拟南芥气孔开放的对照组，孔径 5.29卩标准差1.31卩m, Open_ABA，实验组，孔径 2.77卩标准差0.95卩r与