红细胞血型血清学技术PPT课件.ppt

红细胞血型血清学技术;;标 本;（一）标本采集1．红细胞标本;（一）标本采集1．红细胞标本;（一）标本采集2．血清标标本;（一）标本采集2．血清标标本;（二）红细胞悬液的配制用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一次，其目的是通过洗涤可以去除红细胞表面的下列物质：;★红细胞悬液的常用浓度;★（三）标本的保存;;练习题： 1.用于抗人球蛋白试验的标本要抗凝，否则： A．C3b容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 B．C4b容易致敏红细??造成抗人球蛋白试验假阳性。 C．血型物质吸附于红细胞造成试验结果假阳性. D．血型抗体致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假阳性。 E．A和B。 ;2．血型血清学试验中，关于红细胞悬液使用浓度正确的是： A．2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 B．5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试验及抗人球蛋白试验等大多数血型血清学试验。 C．10%的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和力试验。 D．血型血清学试验与红细胞悬液使用浓度无关。 E．A、B及C均正确。 ;3．关于血清标本保存，以下表述不正确的是： A．没有稀释过的血清如加有防腐剂可在4℃冰箱保存数月；在-20℃以下可保存数年而其抗体活性基本不变。 B．用白蛋白或无抗体活性的AB型血清作稀释剂稀释血清后保存，效果与上述相同。 C．用生理盐水稀释过的血清只限当天使用，不宜保存。 D．用大分子物质做稀释介质，其对抗体活性不起保护作用。 E．用ACD保存液可保存血清3周。 ;盐水介质凝集试验;原 理;★用 途：;例外情况：;盐水介质凝集试验;盐水介质凝集试验（二）、立即离心法：;★延迟立即离心的后果： 反应时间过长而延误立即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。 如果在室温放置2分钟后离心，可能使3+～4+的凝集减弱为0～1+，并伴有溶血现象。 如果在室温放置5分钟后离心，原有的凝集可能消失，并有溶血。 有的标本在延迟离心后，本来应有的凝集会变为既不凝集也不 溶血，因而难以发现ABO血型的不配合，这多数发生在O型人的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应的试验中，发生率为2%～3%。;★发生上述现象的原因： 反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗原作用时，补体C1在有Ca2+存在的条件下，固定到红细胞膜上，妨碍了红细胞的凝集，进一步可能引起溶血。;;（三）、试验结果的判读和记录;（三）、试验结果的判读和记录;（四）缗钱状凝集的处理;★缗钱状凝集的特点：;★ （四）缗钱状凝集的处理;内在因素： 某些疾病致血浆球蛋白异常时，如高球蛋白血症、巨球蛋白血症时会出现缗钱状凝集。 外在因素： 病人在使用大分子右旋糖酐和羟乙基淀粉溶液作血容量扩张剂时，也可以产生缗钱状凝集。 用玻片法试验时，如温度过高、时间过长，也容易发生这种假凝集，因为玻片接触面大，液体的蒸发面也大，致使血清容易浓缩。 ;★缗钱状凝集的解决方法：;练习题： 4.盐水介质凝集试验适用于IgM抗体活性的试验，但哪种情况例外： A．盐水介质凝集试验用于IgM抗体的检出及鉴定、盐水介质配血试验等。 B．盐水反应性抗体鉴定抗原，如ABO、MN、P等血型系统的抗原。 C．当IgG抗A（B）的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应。 D．当IgG抗C的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应。 E．盐水介质凝集试验可用于检测Lewis血型系统的抗原抗体反应。 ;练习题： 5．血清和红细胞混合后，延迟立即离心的后果 对哪个血型系统抗体的检出影响较大？ A．Rh血型系统。 B．MNSs血型系统。 C．ABO血型系统。 D．P血型系统。 E．Lewis血型系统。 ;练习题： 6．血清和红细胞混合后，延迟立即离心可使某些凝集反应减弱或消失甚至引起溶血，解决方法是： A．血清和红细胞混合后立即离心。 B．用血浆或灭活后的血清做试验。 C．用EDTA盐水配制红细胞悬液，以消除这种现象。 D．稀释血清后再做试验可消除这种现象。 E．以上均正确。 ;酶处理细胞的凝集试验;★(一)、原理 ;★(二)、常用酶的种类;(三)、操作方法; 2．二期法酶试验 二期法也称为间接酶法。木瓜酶和无花果酶适用于二期法。 二期法分两步完成。 第一步是酶处理红细胞：在1份洗涤压积的红细胞中加2份木瓜酶溶液，37℃孵育30分钟，用大量pH7.4的PBS洗涤3次，用生理盐水配成5%的悬液备用。 第二步是在己标记好的试管中加受检血清2滴，再加1滴酶处理过的红细胞悬液，37℃孵育15～30分钟观察结果，凝集和溶血皆属于阳性。如没有反应可转入抗球蛋白试验。二期法也要设立与一期法相同的对照系统。一般用于抗体筛选和抗体鉴定试验。