基因工程在提高发酵产量中的应用.pptVIP

* 一、提高抗生素产量 改良微生物工业菌种，提高抗生素产量，主要依赖物理、化学手段进行诱变育种。 利用基因工程技术有目的地定向改造基因，提高基因表达，以改造菌种的生产能力具有巨大的发展潜力。 Secondary Metabolite Biosynthetic Gene Cluster Activators Repressors Resistance genes Structural genes Pleiotropic Genes Up-regulation Down-regulation Overexpression Improvement of Secindary Metabilite Production Ribosome Engineering Precursor Supply Primary Metabolite × × 抗生素生物合成途径中的某个阶段可能是整个合成中的限速阶段，识别位于合成途径中的“限速瓶颈”，并设法导入能提高这个阶段酶系的基因拷贝数，就有可能增加抗生素的产量 策略一 改变细胞内代谢流的方向 A B C K L K 例1：泰洛星（Tylosin） 产生菌：弗氏链霉菌（S.fradiae） Tylosin（ ） Macrocin O-methyltransferase（ ） S.fradiea T59235 S.fradiea C4 The macrocin O-methyltransferase, which catalyzes the last step in tylosin biosynthesis, was purified, and the sequence of the 35 amino acids at its aminoterminus was determined. 大菌素，macrocin 泰洛星，Tylosin 3’’’-O-甲基转移酶， O-methyltransferase，tylF S-adenosyl-L-methionine 构建重组质粒（3’’’-O-甲基转移酶基因tylF） 转化到弗氏链霉菌 (S.fradiae) 转化菌株泰洛星 (Tylosin) 产量显著提高 提高限速酶的活力，改变细胞内代谢流的方向 策略一 改变细胞内代谢流的方向 增加抗生素生物合成途径中的前体的供给，提高抗生素合成量。 例2：红霉素生物合成甲基丙二酰CoA代谢节点 开源 甲基丙二酰辅酶A变位酶是调节琥珀酰辅酶A向甲基丙二酰辅酶变A变化的关键酶 1. 甲基丙二酰辅酶A变位酶是一种蛋白二聚体， 由2个亚基组成，小亚基MutA，大亚基MutB，以B12为辅酶。 2. 总长度8.6kb 3. 能够催化琥珀酰辅酶A和甲基丙二酰辅酶A异构化 4. GenBank序列号AY117133 lane 1：strain FL2267 (wild-type)，PCR product size is 438 bp. lane 2：strain FL2302 (in-frame deletion)，PCR product size is 318 bp， fragment is smaller than lane 1 due to the 120 bp deletion in mutB. Lane 3：strain FL2281 (polar mutB knockout)，PCR product size is 1,581 bp, fragment includes a120bp deletion, and with the kan gene inserted, an additional 1,263 bp. Lane 4：DNA reference standard ladder with indicated band sizes 1.8kb 2.0kb 438 bp FL2267 野生型菌株 FL2302 非极性mutB 敲除菌株 FL2281 极性mutB 敲除菌株 抗生素生物合成途径中的代谢支路的关键基因敲除， 提高抗生素合成流量。 策略一 改变细胞内代谢流的方向 例3：克拉维酸合成中3-磷酸甘油醛脱氢酶基因敲除 节流 *