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途径探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响 途径探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响 PAGE / NUMPAGES 途径探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响 门路商讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响 纲要：目的：鉴于 FAK/P38MAPK 门路商讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响。方法：制作大鼠阿霉 素肾病模型， 将 50 只 SD 大鼠随机分为 5 组，各组于造模后 7、 21、35d 采集 24h 尿标本，以双缩脲比色法测定大鼠 24h 尿蛋白， 采纳及时定量 PCR 检测胫骨组织中黏着斑激酶 （FAK ）、丝裂原活化蛋白激酶 P38（ p38MAPK ）、血清骨保护素（ OPG）、核因子 KB 受体活化因子配体（ RANKL ）的 mRNA 的表达。结果：⑴与正常组比较，第 7 天，各组尿蛋 白高升（ P0.05）；与模型组比较，激素组、中药组、中药 + 激素组尿蛋白均降低（ P0.05），与本组 21 天对比较，第 35 天，模型组高升，激素组、中药 +激素组降低（ P0.05）。⑵ 与模型组比较，激素组 FAK 、P38MAPK 、OPG mRNA 均降低， RANKL mRNA 均高升（ P0.05，P0.01）；与激素组比较，中药组 FAK 、p38MAPK 、OPG mRNA 均高升（ P0.05，P0.01）， RANKL mRNA 均降低（ P0.05）；第 35 天，中药 +激素组 FAK 、p38MAPKmRNA 、OPG mRNA 高升（ P0.05）。 结论：加味四君子汤可能经过 FAK/P38MAPK 门路，调理 OPG 和 RANKL 的表达，进而促使成骨细胞分化和克制破骨 细胞生成，最后延缓泼尼松引诱的骨质松散的形成。 重点词：阿霉素肾病； 骨质松散； 黏着斑激酶； 丝 裂原活化蛋白激酶 P38 【中图分类号】 R472【文件表记码】 A 【文章编号】 1672-3783（ 2013） 11-0003-02 加味四君子汤是依据李学铭先生所拟“加味四君子汤” 加减而来，李老临床治疗肾病多从肺、脾、肾三藏下手，本 方能降低患者尿蛋白，改良患者生活质量，常用于治疗脾肾 气虚型肾病 [1] 。我们在方中加入活血化瘀药，并在临床中收 到了优秀的成效。近期研究证明，四君子汤能够降低脂质过 氧化物、高升血清超氧化物酶和加强抗自由基损害 [2] 。这可 能与肾病的改良相关，但加味四君子汤可否对骨组织产生影 响，及其详细作用体制仍有待进一步研究。 资料与方法 1.1 动物： SD 大鼠， 180～ 220g， 50 只，洁净级，由广 东省医学实验动物中心供给（合格证号：，医学 实验动物环境设备为福建中医学院动物实验中心鼠类实验 室，洁净级。动物使用切合福建省医学实验动物管理委员会 管理条例。 1.2 药物：加味四君子汤（黄芪 党参 丹参 山萸肉 山 药 茯苓 薏苡仁 当归 金樱子 桑寄生 白术），生药制成 40%的浓缩汤剂，按 0.4mL/20g ，每天上午 8-9 点灌胃 1 次。 原药材由福建省药材企业供给，由福建省人民医院制剂科加 工。 1.3 试剂及仪器：  SYBR Premix Ex TaqTM II  试剂盒 （TaKaRa，RNAiso Plus ，ExScriptTM RT Reagent Kit 试剂盒， Rat_Gapdh_primer （ TaKaRa 企业）；盐酸阿霉素（浙江海正药业股份有限企业） 。 7500Fast 及时荧光定量 PCR 仪（美国 ABI 企业）。 1.4 方法 1.4.1 动物的造模、 分组及给药方法： 以随机数字表将大 鼠随机分为正常组、模型组、激素组、中药组、中药 +激素 组，每组 10 只，除正常组外，各组大鼠经尾静脉一次性注 射盐酸阿霉素 6.5 mg/kg ，正常组经尾静脉一次性注射等量生 理盐水。造模 7 天后，正常、模型组以每天生理盐水灌胃； 激素组以泼尼松 10 mg/（ kg.d） 灌胃；中药治疗组以中药 20mL/ （ kg.d）灌胃；中药 +激素组以中药 20mL/ （ kg.d）灌胃，同时每天以泼尼松 10 mg/ （ kg.d） 灌胃。于第 21 天与第 35 天各组分批处死采血，取材。 1.4.2 察看项目及检测方法 ①24 h 尿蛋白定量：以代谢笼采集 24h 尿液，以双缩脲 比色法测 24 h 尿蛋白。 ②各组 （ FAK ）、（ P38MAPK ）、（OPG）及 （ RANKL ） 的 mRNA 定量： Real time PCR：处死动物， 立刻拿出一侧胫骨，去除软组织和骨髓， -80℃保留。提取骨组织总 RNA 。 测算出  RNA  浓度，将其