常用分子生物学技术——rna干扰技术.pptxVIP

生物芯片（biochip）;基因芯片（gene chip）;基因芯片工作原理：核酸分子杂交;蛋白质芯片 （protein chip）;将不同生物体组织标本按预先设计的顺序排列在固相载体上形成的组织微阵列，是一种高通量、多样本的分析工具。 ; 用人工方法测定并分析核酸的碱基组成及排列顺序，即测定核酸的一级结构。 第一代测序技术：链末端终止法 (Sanger法，双脱氧链终止法);双脱氧链终止法测序;双脱氧核苷三磷酸 (dideoxyribonucleoside triphosphate, ddNTP);测序模板序列;第六章 常用分子生物学技术;RNA干扰技术;RNA干扰 （RNA interference, RNAi）; 2001年，首次报道在哺乳动物细胞中，通过21 个核苷酸大小的siRNA诱导特异性基因沉默。;安德鲁·菲尔 克雷格·梅洛 发现“RNA干扰机制”，获2006年诺贝尔医学奖;RNA干扰的机制;RNA干扰的机制; siRNA（小干扰RNA）：21-23nt，由dsRNA裂解而成的小片段，可诱导mRNA降解。siRNA主要参与抵御外源性病毒核酸的侵染。;第18页/共39页;;RNA干扰技术实施策略 ;体外合成siRNA;短发卡RNA （shRNA）;RNA干扰技术特点 ;RNA干扰技术的应用 ;第25页/共39页;基因打靶 （gene targeting）;第27页/共39页;基因敲除（gene knockout）：宿主基因组中特定功能基因的部分片段被同源的外源DNA片段替代，从而使靶基因失活。;基因敲除小鼠的产生;Lepr8基因敲除小鼠比野生型小鼠（WT） 出现明显体重增加现象;REGγ基因敲除鼠（下图）出现脊椎弯曲等早衰现象;Gab1基因敲除导致小鼠缺血性血管新生、侧枝循环建立出现缺陷（图示上半部分），主要是由于血管内皮细胞管状结构形成的信号调控通路出现障碍而引起的（图示下半部分）。; 酪氨酸酶基因敲除后，本来是黑色的小猪，变成了白色，表现出典型的白化病特征。;基因编辑 （gene editing）;Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9;第36页/共39页;RNA干扰（RNAi) siRNA、miRNA RNA干扰技术策略、应用 基因敲除 基因编辑;作 业 ;感谢您的观看。