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- 2021-12-05 发布于广东
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2021/11/21 * (3)发酵罐培养 ◆接种:通入300L培养基的发酵罐,接种量10%。 控制:级联调节通气量和搅拌转速。 前4h:30℃,pH7.0,DO为30%。 4h后:20℃,pH6.0,DO为60%,5~6.5h。 终点控制:OD值达9.0±1.0,5℃冷却水快速降温至15℃以下。 检测:发酵液杂菌检查 2021/11/21 * (4)菌体收集 连续流离心机:冷却的发酵液,16000 r/min离心收集。 菌体保存:-20℃冰柜,不超过12个月。 检测:干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体干燥失重、质粒结构一致性、质粒稳定性。 2021/11/21 * 3.3 干扰素的分离纯化工艺过程 3.3.1、干扰素分离工艺过程 3.3.2、干扰素的纯化工艺过程 2021/11/21 * 3.3.1 干扰素α-2b分离工艺过程 菌体裂解 预处理 初级分离 2021/11/21 * (1)菌体裂解 裂解缓冲液:纯化水配制,2℃~10℃(pH7.5) 使用保护剂:EDTA,PMSF。 破碎-20℃菌体:2厘米以下的碎块 搅拌:加裂解缓冲液,2℃~10℃,2hr 冻融: 细胞完全破裂,释放干扰素。 2021/11/21 * (2)预处理-沉淀 加絮凝剂聚乙烯亚胺: 2℃~10℃,搅拌45min,对菌体碎片进行絮凝。 加凝聚剂醋酸钙
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