双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展（临床医学资料）.doc

双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展（临床医学资料） 文档信息 属性： F-01NHT0，doc格式，正文29584字。质优实惠，欢迎下载！ 适用： 作为医学资料、临床医学资料写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 2 文1：双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展 2 1 引 言 2 2 BiFC概述 3 3 BiFC的应用特点 5 (1)在活细胞生理环境中直接、原位显示蛋白质相互作用产物。 5 4 BiFC的应用现状 5 5 问题与展望 9 文2：蛋白质分子定向进化简介 10 一、定向进化的思想、概念和原理 10 二、定向进化的基本方法 11 1.易错PCR 11 2.改组 11 3.外显子改组 12 4.随机引发重组 12 5.交错延伸技术 12 6.酶法体外随机-定位诱变 13 7.定向进化的其他方法 13 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展（临床医学资料） 文1：双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展 Abstract：Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) mea two non-fluorescent complementary fragments of fluorescent protein can reassemble to form fluorescent complex and restore fluorescence when they are fused to two protei that interact with each other. BiFC analysis has been used to study interactio among a wide range of protei in many cell types. In this paper, the principle and characteristics of BiFC，the application advances, the limitation and future prospects of BiFC assays are described. Key words：Bimolecular fluorescence complementation(BiFC)；Complementary fragments；Fluorescent complex；Protein-protein interactio 1 引 言 蛋白质相互作用和翻译后修饰的研究使人们对生物调控机制的认识取得了巨大的进展，蛋白质相互作用的研究方法也备受重视，出现了许多具有不同原理和应用特点的相关技术和方法［1-2］。BiFC作为一种用于研究蛋白质间相互作用的新型方法引起了人们的关注。利用BiFC分析能够在活细胞生理环境中原位显示蛋白质相互作用产物，尤其是能在单细胞中同时显示多个蛋白质间的相互作用。近年来，基于BiFC原理的分析方法在蛋白质相互作用和翻译后修饰的研究中逐渐显现出其独特的应用价值。 2 BiFC概述 BiFC原理 GFP及其突变体作为能够在活体中表达且易于检测的报告基因［3］，通常是以完整的氨基酸序列作为标记物。随着对其结构和功能研究的日益深入，不断发掘一些新的特点，如GFP基酸序列中的某些特定位点与氨基末端以及羧基末端之间的序列循环互换后仍然能够正确折叠形成生色团结构并保持荧光特性［4-5］。Hu CD等通过进一步研究发现［6］，在GFP及其突变体氨基酸序列的155或173位点，将其分裂为均不具备发光性能的荧光蛋白片段，即氨基末端片段（含1-154或1-172氨基酸序列）和羧基末端片段（含155-238或173-238氨基酸序列），当某些特定的氨基末端片段与羧基末端片段组合作为标记分子分别与两个能够发生相互作用的蛋白质配偶体形成融合蛋白、并同时在活细胞中表达时，蛋白质配偶体的结合驱使氨基末端片段与羧基末端片段重新组装形成荧光复合物，恢复荧光效应［6-7］。这一现象称为双分子荧光互补（bimolecular fluorescence complementation，BiFC），能产生BiFC效应的氨基末端片段与羧基末端片段称为互补片段。 BiFC的特性 荧光蛋白片段的互补特性 按照不同的分裂位点，每个荧光蛋白可产生两个氨基