甘油的检测方法汇总.docxVIP

甘油的检测方法汇总 甘油的检测方法汇总 甘油的检测方法汇总 甘 油 的 检 测 方 法 汇 总 在发酵行业中， 甘油作为底物， 是发酵液中生物合成的直接前体， 会影响外源蛋白的启动表达效率，其含量的高低直接影响产物的发酵单位， 是决定菌种弃取的重要指标， 是提升工程菌的发酵密度，提升产品生产率的重点。在生物柴油生产中，它是副产物，其含量直接影响生 物柴油的使用性能， 是权衡生物柴油产品质量的重要指标之一。 别的，甘油能与水联合以防备红细胞的冷冻损害， 能延伸红细胞的保存期， 被广泛用作细胞内冷冻保护剂等。 因为甘油用途很广，所以其含量的测定拥有特别重要的意义。 当前国内外甘油含量的测定方法许多，主要有高碘酸氧化法、 Cu2 + 络合比色法、酶比色法法、紫外 - 可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子汲取法等。下边将对其进行简要概括： 一、高碘酸法 原理：高碘酸氧化法是当前常有用于甘油含量检测的方法， 利用高碘酸与甘油发生氧化复原反响，节余高碘酸及反响生成的碘酸与碘化钾反响生成碘， 再用硫代硫酸钠进行滴定， 依据耗费的硫代硫酸钠的量来计算甘油的含量。 操作步骤 正确发酵液 10ml 于 100mL小烧杯中，加少许水溶解，而后转移至 100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀，静置。用移液管正确移取 10mL上述溶液于碘量瓶中， 加入 20mL高碘酸钠溶液，混淆平均后， 于黑暗中避光静置 40min，而后加入碘化钾溶液和 20%盐酸溶液各 15mL，调理 pH 值在 0.8 ～ 1.0 之间，而后用硫代硫酸钠标准溶液滴定， 近终点时， 加入 2mL淀粉指示剂溶液，持续滴定至溶液蓝色消逝。同时做试样空白。 3. 计算： w （V2 V1） C M 100 10 / 50 4 1000 式中： w——样品中甘油的含量，％； V1——空白试样耗费硫代硫酸钠标准溶液的体积， mL； V2——试样耗费硫代硫酸钠标准溶液的体积， mL； C——硫代硫酸钠标准溶液的浓度， mol／L；M——甘油相对分子质量； 二、酶比色法 原理：它是利用酶的特异性催化反响成立的测定甘油的一种酶学方法， 是指甘油在甘油激酶作用下转变为 3- 磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，而后 过氧化氢和 4- 氨基安普比林、 4- 氯酚在过氧化物酶催化下反响生成紫兰色、能在 500 nm 左右有特点汲取峰的醌亚胺，经过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的 H2O2，甘油的含量与生成的 H2O2 成正比，这样用比色法就能够测定甘油的含量。 2. 操作步骤 波长： 500nm (480~520nm) 反应温度： 37℃ 比色杯光径： 1cm 取必定量 R1(参看 R2瓶签 ) 加入 1 瓶 R2中，溶解后即为工作液，工作液早先保温至测试温度。 空白管 校准管 样品管 工作液 1ml 1ml 1ml 蒸馏水 0 0 标准品 样品 0 0 分别混淆平均，在反响温度保温 10 分钟，以试剂空白管校零，记录校准及样品 OD值。 计算： 甘油浓度 =A样品 /A 校准 ×校准浓度（ mmol/L 或 mg/dl ） 三、高效液相色谱法 原理：高效液相色谱法 ( HPLC) 的原理是以液体为流动相，采纳高压输液系统，将拥有不 同极性的单调溶剂或不一样比率的混淆溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 利用色谱柱对待测混淆物先进行分别， 而后再进行检测， 进而实现对试样的剖析， 因此其丈量的正确性和精准度较高，当前已成为检测生化分子较常用的一种方法。 操作步骤 1）第一用水将发酵液稀释 2.5 倍 , 而后加 H3 PO4调 pH至 5.5, 在转速 8000r/min 、温度 4℃下离心 10min, 经微孔滤膜过滤用于 HPLC剖析； 2）将甘油标准系列溶液在最正确色谱条件下进行 HPLC剖析 , 以峰面积外标法定量获得甘油标准曲线； 3）按仍旧品预办理方法办理后进样 5 微升 , 记录峰面积 , 代入线性方程中 , 计算其测定值。将计算值乘以稀释倍数后 , 即得发酵液中甘油的含量。 四、气相色谱法 原理：气相色谱剖析法是用于分别剖析复杂样品中的化合物的一种方法， 其原理是必定量的气体或液体剖析物被注入到柱一端的进样口中， 在载气带动下经过色谱柱， 剖析物的分子会遇到柱壁或柱中填料的吸附。 因为不一样的样品拥有不一样的物理和化学性质， 与特定的固定相有着不一样的互相作用， 使得每一种种类的分子都有自己的经过速率， 所以，剖析物中的各样不一样组分就会在不一样的时间抵达柱的尾端， 进而获得分别。 当化合物从柱的尾端流出时， 它们被检测器检测到，产生相应的信号， 并被转变为电信号输出， 进而确立每一个组分抵达色谱柱尾端的时间