第五章植物花药和花粉培养.pptVIP

第五章 植物花药和花粉培养;植物单倍体培养方法:;植物花药/花粉培养历史;;概念：;;油菜成熟花药的结构;（一）花粉发育时期： 1、适宜时期：单核期，尤其是单核中、晚期(单核靠边期);花粉粒形态：;两者的异同点;花药或花粉培养的作用：;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 ;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。; 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。;2、物种进化研究 可探索亲本染色体组的构成。分析单倍体植物减数分裂时，形成二价体的数目和形状，能确定染色体组内是否存在同源染色体。 3、遗传分析 单倍体植株中基因不受显隐性的影响，每一个基因的作用均能表现出来。能用来研究基因的性质及其作用。还可用于基因的剂量效应分析。;4、构建连锁图谱 双单倍体（DH）群体是永久性群体，能有效地用于遗传图谱的构建。 5、用于遗传转化 能直接表达外源基因，不受显隐性影响。;花粉孢子体发育途径（雄核发育）;一、花粉发育的阶段;二、雄核发育途径;;2、B途径;D为自然条件下小孢子的第2次有丝分裂，形成淀粉粒并萌发出花粉管。;1、雄核发育与P花粉的形成 P-花粉：具胚胎发生潜能的花粉。也称小花粉（S-花粉）或不染色花粉（NS-花粉） （Potential embryogenic pollen）（Small pollen）（No stain pollen） 2、雄核发育与饥饿处理 饥饿处理改变了小孢子的配子体发育方向，启动雄核发育。WHY?;小孢子→雄核和营养核;饥饿处理为什么会引起营养核启动复制？;;胚状体发育途径;通过胚状体途径再生形成小植株;胚状体发育途径;愈伤组织发育途径;愈伤组织转接种到再生培养基;花药和花粉培养方法;一、花药培养;3、培养;二、花粉培养;3、机械游离 （1）磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； （2）超速旋切法 通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 4、小孢子纯化 对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 ;梯度离心前 （小孢子形态、活力不一致）;(二)花粉培养方式 ;4、看护培养 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养 利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养 6、条件培养基培养 利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培养基上培养。花药条件培养基、子房条件培养等。;看护培养图解;三、白化苗现象;（一）白化苗产生的影响因素及机理 1、内因 供体植株基因型（如籼稻比粳稻白苗率高）、花粉发育时期。 2、外因 预处理、培养基成分、激素水平与种类、培养条件和方法、愈伤组织转分化时间等。 3、机理 核基因起关键作用，导致质体DNA缺失，产生白苗。另外地、无性系变异也可能是原因之一。;（二）白化苗的控制;具体方法：;四、影响雄核发育和花粉花药培养的因素;芸苔属植物Brassica napus不同基因型的小孢子产胚率比较;（二）供体植株生长条件和生理状态 1、植株生长条件 光温等因素均能影响花药培养力。一般处于适宜生长条件（如温室中）较好。但物种间存在差异。 2、植株生长时期 一般是开花始期优于开花末期。 3、P花粉的频率 不同温度、日照时数、氮饥饿及生长物质处理提高P花粉的数量 ;（三）花粉发育时期 小孢子发育时期对诱导雄核发育非常重要。;四分体: 醋酸洋红染色;单核晚期;一般而言，单核期（第一次有丝分裂前）对诱导反应最敏感，为最佳培养期。;不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期;对不同发育阶段的花药进行培养测试 确定最佳小孢子发育时期的形态特征 注意形态特征会因品种、发育状态、环境条件的变化而发生变化 ;（四）预处理 预处理是小孢子培养成功的前提条件。 预处理目的：是改变小孢子的发育方向，使尽可能多的小孢子从配子体发育途径转向孢子体发育途径（即成为具胚胎发生潜力的小孢子）。适当的预处理能使绿苗产量大量增加。 预处理方法：主要是对花药进行适度的逆境处理，包括低温、高温、化学物质、离心、射线等。;1、高低温处理 低温预处理：指在接种之前将材料用0℃以上低温处理一段时间后再接种。应用较多。处理温度一般在1-14℃，时间从几小