Promega--双萤光素酶报告基因.ppt

* * * * * * 510/60 is 510+/-30nm 细胞内报告 基因池 信号 新表达的 报告基因 为什么快速应答的报告基因应答性更强? 快速应答 非-快速应答 新表达的 报告基因 信号 第六十二页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 基于报告基因稳定性的动力学模型 第六十三页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 pGL4 Rapid Response Reporters Gene Design Vector Gene Design pGL4.10 [luc2] luc2 pGL4.11 [luc2P] luc2P pGL4.12 [luc2CP] luc2CP pGL4.70 [hRluc] hRluc pGL4.71 [hRlucP] hRlucP pGL4.72 [hRlucCP] hRlucCP luc2 hRluc luc2 hPEST luc2 hCL1 hPEST hRluc hPEST hRluc hCL1 hPEST 第六十四页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 快速应答报告基因的设计 蛋白降解序列 来自PEST鼠鸟氨酸脱羧酶的序列 (40 aa) 来自酵母CL1 序列 (18 aa) RNA 降解序列 根据saimiri疱疹病毒小核 RNA合成的富 AU 因子 (ARE) 萤光素酶基因 为哺乳动物细胞表达优化了密码子 优化了翻译起始序列 (如, Kozak 序列) 缺失了多数已知的转录因子保守结合位点序列 第六十五页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 New Multiple Cloning Region 第六十六页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 pGL4 载体系列的优势 更亮的萤光 Codon optimized for more efficient expression in mammalian cells 更高的灵敏度 Better signal-to-background ratios 提高的应答能力 Greater response dynamics by reducing intracellular stability of the reporter (two versions) 假性表达的风险性减小 Removal of consensus binding sites to reduced likelihood of unintended interactions with host transcription factors 扩展的能力 Inclusion of selectable markers and ability to readily transfer DNA inserts between vectors 第六十七页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 驾御生物萤光的化学 鞘翅目昆虫生物萤光 (萤火虫, 叩头虫,) 珊瑚虫生物萤光 (海肾) 报告基因 Steady-Glo Bright-Glo Dual-Glo Chroma-Glo EnduRen ATP 检测 CellTiter-Glo BacTiter-Glo Kinase-Glo 偶联萤光素 Caspase-Glo P450-Glo Beta-Glo 第六十八页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 联系我们 , 全部产品信息, 操作手册,技术资料, 网上工具 , 大部分产品介绍和价格, 少量中文说明书,中文资料 E-mail: promega@ 免费电话: 800 810 8133 第六十九页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 Precision Design…for Life Thanks ! 第七十页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * pGL3-Promoter Map 第三十页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 辅助报告基因的相对萤光单位 (RLU) 启动子交叉交谈或互相干扰 实验刺激给辅助报告基因的不必要的调节 内对照载体可能存在的问题 第三十一页，编辑于星期二：十七点 四十六分。 载体 - 海肾萤光素酶报告基因载体 第二代 第一代 phRL-null pRL-null phRL-TK pRL-TK phRL-TK (int-) phRL-SV40 pRL-SV40 phRL-CMV pRL-CMV phRG-B phRG-TK 第三十二页，编辑于星期二：十七点 四十