发根农杆菌介导的植物基因转化.ppt

发根农杆菌介导的植物基因转化;发根是发根农杆菌 （Agrobacterium rhizogenes)感染整体植株或其某一器官、组织、单个细胞甚至原生质体后，产生的一种形态上与植物气生根类似的根状器官.;;什么是发根农杆菌 ?;Ri质粒;Ri 质粒 T－DNA区和 Vir 区的两个功能区. T－DNA叫可转移DNA区, 可插入到寄主植物基因组中，其中携带生根基因和冠瘿碱合成酶的基因. Vir 称致病区, 不插入到寄主植物基因组DNA中，但与T－DNA的转移有关， Vir 区 缺失或突变则不能使感染的植物出现发根 ;LB;;发根农杆菌感染植物伤口后，受伤的植物细胞合成特殊的小分子化合物，诱导 Ri 质粒的Vir区基因群活化； 在Vir区基因表达产生的酶作用下T－DNA被切下； T－DNA转移进细胞并整合到植物基因组DNA中； T－DNA在细胞中转译，使宿主植物产生发根 ;发状根的特点;发根农杆菌感染植物的方法; 含抗生素的培养基上继代培养除菌 选择生长速度较快、分枝较多的发根进行扩大培养 增殖培养常在低盐浓度的液体培养基中黑暗、恒温条件下进行悬浮、振荡培养，适当通入氧气利于根的生长 . 一般为每月增殖数十倍，最高可达上千倍（如天仙子发根每月增殖2500～5000倍） ;发根的鉴定;影响发根农杆菌转化的因素 ; 目前超过100,000种化合物被从植物中鉴定，并以每年约4000种新化合物的速度增加. 植物次生代谢物质大多具有生物活性，被用作医药品、化妆品、食品添加剂等;;植物次生代谢物的获得; 对Ri质粒的敏感性：双子叶植物 单子叶植物，草本植物木本植物 在感染转化的受体选择上，倾向于将叶片、子叶、子叶柄、胚轴作为外植体 将菌株、植物、外植体进行不同的组合，会导致发根诱导率的变化 ; 水溶性酚 ：乙酰丁香酮、羟基乙酰丁香酮、儿茶酚、原儿茶酚、没食子酸、焦性没食子酸、二羟基苯甲酸、香草酚、对羟基苯酚 等，可激活Vir区基因表达 光照 ; 感染前高渗处理、 诱导培养时添加生长素等;影响发根培养及次生代谢物合成的因素;5. 培养方法 固体培养 液体培养法进行成批培养或大规模发酵培养 两步培养法 两相培养法 反复成批培养 补料成批培养 6. 生物反应器 发根易受剪切力伤害，且其生长迅??，密度高，供氧困难，保持低的流体压力和高的溶氧量十分必要 通气性能良好且剪切力较小的反应器是其理想反应器;;发状根的用途;丹参发根生物反应器大规模培养技术 ;;