PCR技术讲解稿件.ppt

PCR技术;第一节 PCR技术的基本原理 第二节 PCR反应体系中的各 种组分分析 第三节 PCR技术的分类 第四节 PCR技术的应用 第五节 DNA分子标记;基因克隆;;PCR;PCR;PCR技术操作简便，可以在试管中建立反应，经数小时之后，就能将极微量的目的基因或某一特定的DNA片段扩增109倍，且无需烦琐的基因克隆程序，便可获得足够数量的精确的DNA拷贝。;第一节 PCR技术的基本原理;一、 PCR技术的基本原理;二、PCR扩增过程;1、高温变性;2、低温退火;3、适温延伸;PCR原理;PCR扩增过程;PCR原理;PCR的反应动力学 ;三、PCR技术的特点;高度的敏感性;高度的特异性;高度的特异性;操作简便快速;PCR仪生产厂家;PCR仪种类;PCR仪;techgene 英PCR仪;半导体式全自动PCR仪;适用样品的广泛性;第二节 PCR反应体系中的各组分分析;一、引物;引物设计原则;引物设计原则;引物设计原则;引物设计原则;常用引物修饰法;引物的保存和使用浓度;二、DNA Pol;T4 DNA pol和T7 DNA pol;Taq DNA pol的发现;用于PCR的pol种类;各种耐热DNA pol的特性;Taq DNA pol的特点;Taq DNA pol酶活性;离子依赖性 ;Taq DNA pol的忠实性;Taq DNA pol的抑制剂 ;Taq DNA pol的灭活;Taq DNA pol的使用浓度和生产厂家;三、DNA 模板;DNA 模板的用量;DNA 模板的纯度;DNA模板的制备;DNA模板的制备;四、dNTPS;dNTP的浓度;五、PCR反应的缓冲液;缓冲液配方;六、Mg2+浓度;七、PCR反应条件的选择;变性温度与时间;退火温度与时间;延伸温度与时间;延伸终止;循环次数;八、标准的PCR反应体系;九、PCR扩增产物的分析;凝胶电泳分析;凝胶电泳分析;PCR扩增P53基因;酶切分析;PCR产物的酶切;分子杂交;核酸序列分析;十、常见问题分析与对策;假阴性，不出现扩增条带;假阴性的原因——模板;假阴性的原因——酶失活;假阴性的原因——引物;假阴性的原因——Mg2+浓度;假阴性的原因——反应体积的改变;假阴性的原因——物理原因;假阴性的原因——靶序列变异;假阳性;假阳性的原因——引物设计不合适;假阳性的原因——靶序列或扩增产物的交叉污染;假阳性的原因——靶序列或扩增产物的交叉污染;出现非特异性扩增带;出现非特异性扩增带的原因;出现非特异性扩增带采取的对策;出现片状拖带或涂抹带;出现片状拖带的原因;出现片状拖带的对策;污染原因;污染原因;污染原因;污染原因;污染的监测;阳性对照;阴性对照;防止污染的方法;防止污染的方法;防止污染的方法;防止污染的方法;防止污染的方法;第三节 PCR技术的分类;正常PCR（Normal PCR）;巢式PCR（Nested PCR）;;分类;半巢式PCR;中途进退式PCR;巢式PCR的应用;复合PCR;;复合PCR产物的电泳图谱;复合PCR的应用;复合PCR的应用;复合PCR的应用;多重PCR的特点;不对称PCR;;不对称PCR的应用;反转录PCR;;RT-PCR;RT-PCR;RT-PCR操作步骤;RT-PCR的应用;常用的反转录酶;反向PCR;原理;;反向PCR的应用;锚定PCR;;锚定PCR的应用;修饰引物PCR;彩色PCR;荧光染料;荧光的产生;;彩色PCR的应用;免疫PCR;免疫PCR的步骤;链亲和素-蛋白A嵌合分子;免疫-PCR优点;原位PCR;原位PCR方法;原位PCR方法;原位PCR的优点;重组PCR;;第四节 PCR技术的应用;一、PCR在分子生物学中的应用;DNA clone;引入点突变、缺失或插入;重组PCR;DNA序列的测定;二、PCR在临床医学中的应用;遗传性疾病的基因诊断;地中海贫血病的病因;α和β珠蛋白基因的突变类型;传统的产前诊断方法;PCR产前诊断胎儿标本的来源;α基因全部缺失的PCR诊断;α基因全部缺失的PCR诊断;;;PCR技术在β地贫基因诊断中的应用;PCR-寡核苷酸探针斑点杂交(PCR-ASO);PCR-寡核苷酸探针斑点杂交;PCR-ASO检测结果;PCR技术在检测病毒性疾病中的应用;HIV的基因结构;HIV的基因结构;HIV的PCR检测;HIV的PCR检测;HIV的PCR检测;PCR技术在检测癌基因中的应用;三、PCR在法医学上的应用;一、RFLP标记 二、RAPD标记 三、AFLP标记;一、RFLP标记;DNA物理图谱的构建;RFLP作图原理;;RFLP的应用;RFLP检测酶切位点的出现或消失;亲子鉴定;二、RAPD标记;随机引物;RAPD的特点;RAPD图;RAPD;RAPD;RAPD鉴定种质资源